[发明专利]一种水解纤维蛋白溶酶原多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及水解纤维蛋白溶酶原多肽及其应用，具体涉及具有促进纤维蛋白溶酶原水解成血管抑素，治疗恶性肿瘤的多肽。

背景技术

1971年Folkman提出肿瘤生长和转移依赖新生血管生成。并认为实体瘤形成后，其发展可分为无血管期和血管期两个阶段。无血管期，微小肿瘤的存在依靠周围间质弥散供血，生长速度呈线性，肿瘤限制在1mm～2mm之内，瘤细胞数少于10⁵～10⁶个，迫使肿瘤处于“休眠状态”；进入血管期后，肿瘤组织为灌注性供血，瘤体呈指数性生长，2周后可增大1.6万倍。新生血管不仅提供肿瘤所需要的营养和氧气，排除代谢产物，而且是远处转移的途径。因此，阻断肿瘤新生血管形成就可能阻止肿瘤生长和转移，抗新生血管疗法也成为肿瘤治疗的手段之一。

血管抑素是纤维蛋白溶酶原的水解产物，有较强的血管生成抑制活性。大量研究证实血管抑素在体外能抑制内皮细胞的生长和迁移，在体内试验中可抑制新生血管形成，从而诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长，使肿瘤处于“休眠状态”。

因此，促进纤维蛋白溶酶原水解，形成血管抑素，可以有效抑制体内血管内皮细胞增殖，抑制肿瘤的生长。从而，达到治疗肿瘤的效果。

目前，没有成熟开发的水解纤维蛋白溶酶原多肽问世，用于治疗恶性肿瘤。

本专利中的水解纤维蛋白溶酶原多肽已证明在治疗子宫癌中有效，具有在其他肿瘤模型中开发的前景。

发明内容

发明目的

本发明提供全新的序列，该序列为水解纤维蛋白溶酶原多肽，对恶性肿瘤具有很好的疗效。

技术方案

水解纤维蛋白溶酶原多肽，其特征在于其序列为THELGHLSQKLYGKRSN。

水解纤维蛋白溶酶原多肽在治疗恶性肿瘤，如子宫癌药物中的应用。

有益效果

利用固相合成法化学合成水解纤维蛋白溶酶原多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可体外促进纤维蛋白溶酶原水解，治疗恶性肿瘤，如子宫癌。我们发现的水解纤维蛋白溶酶原多肽可以同时抑制血管内皮细胞增殖活力，并在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。

具体实施方式

实施例1

水解纤维蛋白溶酶原多肽对体外培养人血管内皮细胞的生长和存活IC50。

采用MTT比色法。将对数生长的人血管内皮细胞HUVEC，以1.0×10⁵加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物水解纤维蛋白溶酶原多肽(上海生工合成)和阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，分别在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、，48h每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式HUVEC生长抑制率＝(1-实验组吸光值/对照组吸光值)×100％。计算出实验药物的IC50为7.98μM，紫杉醇IC50为5.12μM。

实施例2

用肿瘤模型检测水解纤维蛋白溶酶原多肽的体内活力。

建立子宫癌肿瘤模型，阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂，实验组多肽(上海生工合成)设3个剂量：0.75、1.5、3μM/Kg。21天后，观察小鼠存活数量，计算存活率。结果显示，水解纤维蛋白溶酶原多肽可有效地保护小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率达到78.5％，紫杉醇31.2。

实施例3

水解纤维蛋白溶酶原多肽对人宫颈癌细胞HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

取对数生长期的人宫颈癌细胞HeLa细胞株，在无菌条件下制备成5×10⁶/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm³后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，每周给药1次；每天给药1次；多肽以20mg/kg每天给药1次。肿瘤体积计算公式：

TV＝0.52×a×b²

其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：

T/C(％)＝T_RTV/C_RTV×100％