[发明专利]多肽及其胰菠酶片组合物和应用

说明书

技术领域

本发明属于蛋白质或多肽技术领域，具体而言，本发明涉及新的多肽及其药物组合物，优选还涉及其与其他活性成分组成的胰菠酶片等。另外，本发明还涉及上述化学产品的制备方法和医药应用等。

背景技术

Phlogenzym片，也称二酶片或胰菠酶片，其活性成分主要由蛋白质组成，用于减轻创伤后和手术后水肿，缩短血块凝聚时间，减缓肿胀和炎症引起的疼痛，并可用于诸如血栓性静脉炎、泌尿生殖道炎症、关节炎(如，慢性关节炎)和软组织风湿病等疾病的治疗。然而，由于在制备片剂时通常需要高温压片，对于含蛋白质的制剂来说，特别容易使得蛋白质活性降低，因此需要加入更大量的活性蛋白质。而且，高温变性的蛋白质也更容易引起过敏反应，增加了潜在的安全性隐患。

为此，中国专利申请第200410030650.7号等现有技术通过直接装入肠溶性胶囊来避免高温压片，但是这并没有从根本上改变活性蛋白质的性质，尤其是长时间高温储存的稳定性。

然而，本发明人没有受现有技术“走捷径”的方式影响而通过制剂类型和配方等方式来入手，而是从更为本质的结构改造入手，经过艰苦的研究和长期的实践，令人意外地研发出一种新的多肽，其相对于野生型蛋白质(参见GenBank登录号BAA21929.1)，具有更好的稳定性，特别适合实际的储运和保存。另外，本发明人还研发了一种新的二酶片的生产工艺，充分利用了其高温储存的稳定性，可以直接采用现有高温喷雾包衣的设备，这与现有的肠溶胶囊的改进方向正好相反，也不必额外购买制备Phlogenzym片的低温设备。

发明内容

本发明的要解决的技术问题在于提供新的多肽及其药物组合物，优选是胰菠酶片。另外，本发明还涉及上述化学产品的制备方法和医药应用等。

具体而言，在第一个方面，本发明提供了多肽，其氨基酸序列

(1)如SEQ ID NO：2所示；或

(2)是在SEQ ID NO：2所示序列上添加、缺失和/或取代一个或几个氨基酸残基而得的。

本发明的第一个方面的多肽的氨基酸序列可以是在SEQ ID NO：2所示序列上添加、缺失和/或取代一个或几个(优选一个至五个，更优选一个至三个)氨基酸残基而得的氨基酸序列。本领域技术人员知晓，通过改变已知多肽的编码基因序列并将其导入表达载体，可以制备出取代、添加或缺失了氨基酸残基的多肽，这些方法广泛记载于《分子克隆实验指南》(北京：科学出版社，2002年)等本领域公知的文献中。在取代的氨基酸残基中，优选取代为与原氨基酸残基侧链性质相似的其他氨基酸，从而更得以保持原有功能活性。侧链性质相似的氨基酸分别有疏水性氨基酸(A、I、L、M、F、P、W、Y、V)、亲水性氨基酸(R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T)、脂肪族侧链的氨基酸(G、A、V、L、I、P)、含羟基侧链的氨基酸(S、T、Y)、含硫原子侧链的氨基酸(C、M)、含羧酸和酰胺侧链的氨基酸(D、N、E、Q)、含碱性基团侧链的氨基酸(R、K、H)、含芳香族侧链的氨基酸(H、F、Y、W)。在本发明的具体实施方式中，多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明的第一个方面的多肽具有GenBank登录号BAA21929.1所述的野生型蛋白质的酶活性，例如可以根据Harrach等(J Protein Chem,14:41-52)所述的蛋白酶活性检测方法来进行。

优选本发明的第一个方面的多肽相对于GenBank登录号BAA21929.1所述的野生型蛋白质的稳定性提高，优选是耐高温稳定性和/或长期保存稳定性的提高。在经历高温和/或一段时间后测定本发明的第一个方面的多肽和野生型蛋白质各自的酶活性，可以方便地显示出本发明的第一个方面的多肽的优势。其中，GenBank登录号BAA21929.1是记录于公共数据库的现有技术，其描述了提取自植物的野生型蛋白质(酶)，目前多直接采用从植物中提取的方法来获得，几乎没有现有技术对其进行基因工程改造，所以更加无法通过该野生型蛋白质的氨基酸序列来获得本发明的第一个方面的多肽。