[发明专利]一种检测马泰勒虫的引物对及检测试剂盒

说明书

技术领域

 本发明涉及一种动物寄生虫的检测鉴别技术，确切讲本发明涉及一种用于检测马泰勒虫的引物，以及一种快速鉴定马属动物是否感染马泰勒虫的检测试剂盒。

背景技术

马泰勒虫 (Theileria equi)隶属于原生动物门（Protozoa）、顶复动物亚门(Apicomplexa)、孢子虫纲（Sporozoea）、梨形虫亚纲( Piroplasmia )、梨形虫目（Piroplasmida）中的泰勒科(Theileriidae)泰勒虫属(Theileria)。马泰勒虫是马梨形虫病的重要病原之一，所引起马属动物的疾病称之为马泰勒虫病，该病是经过节肢动物—蜱作为媒介传播寄生于马属动物（包括马、驴、骡、斑马等）巨噬细胞、淋巴细胞和红细胞内，引起患畜的高热、贫血、消瘦和体表淋巴结肿胀为特征的一类血液原虫病，偶尔也有死亡案例的报道。据估计，世界每年约有5.0×10⁷ 头匹（头）的马属动物受到该病的威胁。本病的季节流行性很强，多呈现急性经过为主，发病率和死亡率均很高，尤其对外来引进的马属动物、纯种马以及杂交马的危害更大，是制约发展中国家马属动物养殖业发展的主要疾病之一。目前，马泰勒虫病的诊断主要有以下几种手段：（1）血涂片染色显微镜检测、淋巴结穿刺试验、体外培养以及动物接种试验等；（2）血清学方法，如：补体结合试验（CFT）、间接荧光抗体试验（IFAT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和竞争酶联免疫吸附试验（C-ELISA）等；（3）分子生物学方法，如： PCR、二温氏- PCR、巢氏-PCR（nPCR）以及反向线性印记技术（RLB）等。参见Grandi G et al. Prevalence of Theileria equi and Babesia caballi infection in horses from northern Italy. Vector-Borne and Zoonotic Diseases, 2011, 23:1-2；Georges K C et al. A case of transplacental transmission of Theileria equi in a foal in Trinidad. Veterinary Parasitology, 2011, 175(3-4): 363-366； Georges K C et al. A case of transplacental transmission of Theileria equi in a foal in Trinidad. Veterinary Parasitology, 2011, 175(3-4): 363-366；Donnelly, J et al. Evidence of maternal antibodies to Babesia equi and B. caballi in foals of seropositive mares. Equine Vet J. 14,126-128. Weiland, G et al. Serodiagnosis and therapy control of equine piroplasmosis by CFT and IFAT. Berl Munch Tierarztl Wochenschr. 1984, 97(10):341-9； Knowles DP Jr et al. A monoclonal antibody defines a geographically conserved surface protein epitope of Babesia equi merozoites. Infect Immun. 1991, 59(7):2412-7； B?se Ret al. Current state and future trends in the diagnosis of babesiosis. Vet Parasitol. 1995, 57(1-3):61-74； Brüning A et al. Monoclonal antibodies against Babesia caballi and Babesia equi and their application in serodiagnosis. Vet Parasitol. 1997, 68(1-2):11-26；Kappmeyer LS et al. Detection of equine antibodies to babesia caballi by recombinant B. caballi rhoptry-associated protein 1 in a competitive-inhibition enzyme-linked immunosorbent assay. J Clin Microbiol. 1999 Jul;37(7):2285-90； Bashiruddin JB et al. Molecular detection of Babesia equi and Babesia caballi in horse blood by PCR amplification of part of the 16S rRNA gene. Vet Parasitol. 1999 Jul;84(1-2):75-83；Sahagun-Ruiz A et al. Biotin-labeled DNA probe in a PCR-based assay increases detection sensitivity for the equine hemoparasite Babesia caballi. Vet Parasitol. 1997 Dec 15;73(1-2):53-63。综上所述，传统诊断方法虽然具有操作简单，节省经费等特点，但是却存在检出率低等缺点；血清学诊断方法常会出现假阳性、漏检、特异性差等情况。同样的分子诊断方法也不可避免的存在特异性差、敏感性低、假阳性等特点。因此，寻找一种敏感性高，检测准确，消耗时间少且能准确定量的检测方法就显得非常有必要。这在临床诊断、治疗和研究中都具有重要的特殊意义。