[发明专利]水稻磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2及其应用

权利要求书

1.一种高等植物来源的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2，其特征在于,所述磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2来自水稻，能够在植物遗传转化过程中作为筛选标记。

2.根据权利要求1所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2，其特征在于，所述磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2的DNA序列与SEQ ID No:1所示的DNA序列有至少90％同源性；

或者，所述磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2为在SEQ ID No:1所示的DNA序列中添加、取代、插入或缺失一个或一个以上核苷酸生成的突变体或等位基因或衍生物；

或者，所述磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2包含与SEQ ID No:1所示的DNA序列杂交的产物。

3.根据权利要求2所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2，其特征在于，所述磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，优选地，在提取所述磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2时，所采用的引物为正向引物5’-ATGGAGGACCCGCCGCCGCCGC-3’，反向引物5’-TTAACTGAAGAATCTGCTGTTT-3’。

4.一种原核表达载体，其特征在于，所述原核表达载体包含权利要求1-3之一所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2。

5.一种用于鉴定所述磷酸甘露糖异构酶的酶活分析方法，其特征在于，所述鉴定方法包括：利用两步偶联法对包含权利要求1-3之一所述的磷酸甘露糖异构酶基因的编码蛋白或权利要求4所述的原核表达载体的表达蛋白进行酶活分析。

6.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒中包含权利要求1所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2。

7.一种植物表达载体，其特征在于，所述植物表达载体包含权利要求1-3之一所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2和/或权利要求6所述的表达盒。

8.一种利用含有权利要求1中所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2的植物表达载体获得植物转化细胞或植物部分的方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：

(1)利用植物种子以及愈伤组织诱导培养基制备相应的次级愈伤组织；

(2)对所述次级愈伤组织进行进一步预培养，获得能够用于转化的愈伤组织；

(3)利用所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2制备植物表达载体pCAMBIA1381-OsPMI2，其中，pCAMBIA1381为现有植物载体；

(4)将所述植物表达载体pCAMBIA1381-OsPMI2转入根癌农杆菌中，并且将步骤(2)中获得的愈伤组织与转入了所述植物表达载体pCAMBIA1381-OsPMI2的根癌农杆菌相接触；

(5)将步骤(4)处理后的愈伤组织转移到其上垫有无菌滤纸的培养皿中进行培养；

(6)将步骤(5)处理后的愈伤组织置于前筛选培养基上进行培养；

(7)将步骤(6)处理后的愈伤组织转移至筛选培养基上，以获得抗性愈伤组织，所述筛选培养基中包含甘露糖，所述抗性愈伤组织为能够代谢甘露糖的植物转化细胞，

优选地，所述植物为水稻，所述植物转化细胞为水稻转化细胞。

9.一种权利要求1所述磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2、权利要求4所述的表达盒、权利要求5所述的植物表达载体的应用，其特征在于，所述应用包括利用所述磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI2作为筛选标记，基于权利要求6所述的方法获得植物转化细胞，并利用所述植物转化细胞获得转基因植物或植物部分。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述植物包括：粮食作物、蔬菜作物、花卉作物、能源作物；所述植物部分包括：细胞、原生质体、细胞组织培养物、愈伤组织、细胞块、胚芽、花粉、胚珠、花瓣、花柱、雄蕊、叶、根、根尖、花药和种子。