[发明专利]徐长卿C21甾体转化产物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及徐长卿C21甾体转化产物及其在制备肿瘤细胞多药耐药逆转剂中的应用，还涉及徐长卿C21甾体转化产物制备方法。

背景技术

恶性肿瘤是目前严重危害人类健康的疾病之一，它以细胞异常增殖和转移为特点。世界卫生组织统计资料表明，2000年全球新发恶性肿瘤病例约1000万，死亡620万，患病2200万例；预计到2020年恶性肿瘤新发病例将达到1500万，死亡1000万，患病3000万例。化疗是恶性肿瘤综合疗法的方法之一，广泛用于术前、术中和术后，但肿瘤细胞多药耐药现象严重影响化疗对恶性肿瘤的疗效。克服肿瘤药物的多药耐药，恢复耐药肿瘤细胞对药物的敏感性，寻找高效低毒的肿瘤细胞多药耐药逆转剂是当前肿瘤治疗药物的研究方向。

肿瘤细胞多药耐药是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性的同时，对结构和作用机制完全不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药性。肿瘤细胞多药耐药是肿瘤难治愈的主要原因之一，据美国癌症协会估计，90%的癌症化疗失败归因于多药耐药。

徐长卿系萝藦科Asclepiadaceae牛皮消属植物徐长卿Cynanchum paniculatum(Bge.) Kitag.的干燥根及根茎，始载于《神农本草经》，为《中国药典》2010年版所收载，味辛，性温，具有祛风化湿，止痛止痒的功能，用于风湿痹痛，胃痛胀满，牙痛，腰痛，跌扑损伤，荨麻疹，湿疹。现代中医临床应用主要集中在镇痛和皮肤疾病等方面（张永清，等. 中医研究，2005，18（11）：55-58.），药理研究集中在其所含的化学成分丹皮酚上，研究表明丹皮酚具有抗炎镇痛、抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗蛇毒、保护心血管和免疫调节等药理作用（曾粤. 内蒙古中医药，2012，31（11）：125-126.）。已有文献报道从徐长卿中分离鉴定C21甾体类化合物，但目前未见高含量徐长卿C21甾体转化产物的产品；未见有关徐长卿C21甾体转化产物在制备肿瘤细胞多药耐药逆转剂方面的研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，开发利用迄今为止应用尚不广泛的萝藦科牛皮消属植物徐长卿Cynanchum paniculatum (Bge.) Kitag.，尤其是其C21甾体类成分。

本案发明人通过对徐长卿进行细致深入的研究，发明了高含量徐长卿C21甾体提取物提取分离纯化方法，制得的提取物经药理活性研究证明具有逆转肿瘤细胞多药耐药作用。在此基础上，本案发明人制备了徐长卿C21甾体转化产物，比较了徐长卿C21甾体提取物和徐长卿C21甾体转化产物逆转肿瘤细胞多药耐药作用，结果表明徐长卿C21甾体转化产物的逆转作用显著增强，因而完成了本发明。

本发明目的在于提供徐长卿C21甾体转化产物及其在制备肿瘤细胞多药耐药逆转剂中的应用。

本发明另一目的在于提供徐长卿C21甾体转化产物制备方法。

为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

本发明提供的徐长卿C21甾体转化产物中C21甾体苷元重量百分含量大于等于90%，制备方法包括以下步骤：徐长卿干燥根和根茎粉碎后，加90%乙醇回流提取三次，每次用量为徐长卿干燥根和根茎重量的8倍体积量，每次提取时间为2小时，分次滤过，提取液合并，减压回收乙醇，所得提取物加水溶解，经大孔吸附树脂柱D101色谱，填充大孔吸附树脂D101体积为徐长卿干燥根和根茎重量的0.5倍体积，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用30%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用70%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，经已处理好的脱色树脂D941柱色谱，填充脱色树脂D941体积为徐长卿干燥根和根茎重量的0.5倍体积，用6倍柱体积90%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥得洗脱物，洗脱物加2 %硫酸溶液水解，硫酸溶液体积为徐长卿干燥根和根茎重量的2倍体积量，置80℃水浴中加热回流5小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，乙酸乙酯每次体积徐长卿干燥根和根茎重量的1倍体积量，提取液合并，回收乙酸乙酯得徐长卿C21甾体转化产物。

本发明提供徐长卿C21甾体转化产物在制备肿瘤细胞多药耐药逆转剂中的用途。