[发明专利]纯绿青霉菌株及用其生产麦角甾醇过氧化物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用菌株生产化学品的技术领域，具体涉及一种用纯绿青霉菌株LPPV001制备麦角甾醇5,8过氧化物的方法。

背景技术

纯绿青霉菌株LPPV001来源于四川凉山产地衣植物内生真菌，经自采方式提取，

保藏号为CGMCC NO. 10145保藏日期：2015年1月4日，保藏地点：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。植物甾醇具有营养价值高、生物活性强的特点，是多种激素、维生素D及甾族化合物合成的前体，广泛应用在医药、化妆品、动物生长剂及纸张加工、印刷、纺织、食品等领域。研究发现过氧麦角甾醇具有促进白血病细胞HL60细胞（Toshiyuki Takei, Mitsuru Yoshida, Mayumi Ohnishi-kameyama, et al. Ergosterol peroxide, an apoptosis-inducing component isolated from Sarcodon aspratus (Berk.) S. ito, Biosci, biotechnol biochem, 2005, 69 (1): 212-215）和肝癌细胞(HepG2)（苏日古格, 包海鹰, 图力古尔等. 蒙古口蘑子实体的抗肿瘤活性, 食品科学, 2012, 33 (21): 280-284）凋亡的活性，同时具有抗氧化（冯建, 秦淑亮, 胡兵等. 色钉菇子实体化学成分及其生物活性初探, 菌物学报, 2014, 33 (2): 355-364）、抗菌（麻兵继, 文春南，吴婷婷等，麦角甾醇过氧化物的抑菌活性研究, 食品研究与开发, 2012, 33 (7): 42-44）以及抗结核（魏丹丹等，2009）等广泛的药理作用。麦角甾醇5,8过氧化物是在真菌中较为广泛存在的一个具有较广泛生物活性的植物甾醇类化合物。而本发明提取的该纯绿青霉菌株LPPV001，可以通过发酵产生麦角甾醇5,8过氧化物且产率极高，经简单提纯即可得到麦角甾醇5,8过氧化物纯净物。

在对地衣内生真菌化学成分的研究过程中，课题组从四川产拟肺衣植物中分离得到一株纯绿青霉菌(Penicillium verrucosum LPPV001，中国科学院微生物研究所命名)，经研究发现其菌丝体提取物中麦角甾醇过氧化物的含量极高，最高可达到0.45g/g（麦角甾醇/菌丝体）。该菌株具有生长速度快，生长条件温和，代谢过程简单等优点，适于工业大规模培育，且产物产率高，适于提取。发酵培养基采用土豆培养基，成本低，制备简单，易于操作，产量高，发酵周期短，可实现规模生产。

本发明具备较大的实践意义，麦角甾醇5,8过氧化物是重要的有机中间体，目前尚未发现其他菌株能够实现对此物质的发酵产率能达到如此高的水平，以及如此方便简单的提纯条件，为麦角甾醇5,8过氧化物的提取开辟了一条简单易操作的技术路线。

发明内容

本发明旨在提供Penicillium verrucosum LPPV001及其产物麦角甾醇5,8过氧化物制备方法，所述麦角甾醇5,8过氧化物结构如图1。

本发明所涉及的麦角甾醇5,8过氧化物的生产菌是Penicillium verrucosumLPPV001，由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC NO. 10145，保藏日期：2015年1月4日，保藏地点：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

本发明保护一种制备麦角甾醇5,8过氧化物的方法：发酵Penicillium verrucosum LPPV001，经乙酸乙酯萃取，过硅胶柱层析，以石油醚和丙酮的混合溶剂洗脱，得到麦角甾醇5,8过氧化物纯品。所述发酵的条件具体可为种子液摇床2天，5%的接种量，26.7℃，转速为150转/分钟，摇床15天。

一种用菌株LPPV001生产麦角甾醇5,8过氧化物的生产方法，其特征在于：