[发明专利]镉强诱导启动子CdS2及其应用

权利要求书

1.一种植物镉强诱导表达启动子CdS2在培育转基因植物中的应用，其特征在于，所述植物镉强诱导表达启动子CdS2由SEQ ID No:1所示的DNA序列构成，所述应用包括：

将消毒后的水稻种子用无菌水在30℃黑暗条件下浸泡过夜，用解剖刀将胚剥下置于诱导培养基上，每皿均匀放置12个胚，在30℃黑暗条件下放置2～3周诱导愈伤组织，至长出淡黄色颗粒状愈伤组织；

从诱导培养基上挑选颗粒状、不带病斑的愈伤组织置于新的诱导培养基上，于30℃黑暗条件下培养3～5d；

将预培养的愈伤组织转移至50mL无菌管中，加入超表达载体的农杆菌菌液浸泡20min，倒出菌液，并用无菌滤纸将残余菌液吸干，后将愈伤组织均匀撒在共培养培养基上，于23℃黑暗条件下培养2～3d；

将共培养的愈伤组织转移至恢复培养基上，愈伤组织之间尽量避免重叠，23℃黑暗培养3～5d；

从筛选培养基上挑选不带菌斑颜色鲜亮呈淡黄色颗粒状的抗性胚性愈伤组织，每皿30粒接种于筛选培养基，30℃黑暗培养2～3周，至长出新的抗性颗粒状愈伤组织；

每一转化事件挑选三个独立的胚性愈伤组织到分化培养基某一区域，30℃光照培养室条件下培养3～4周，待幼苗长出；

每一区域挑选两棵健壮的幼苗移栽至生根培养基，30℃组织培养室光周期，16h光照/8h黑暗，培养三周左右，进行鉴定并移栽至田间；

对所培养出的水稻种子，进行镉处理，经镉处理后，Gus基因表达量是处理前的887.9倍；

其中，超表达载体如下构建：

根据所述植物镉强诱导表达启动子CdS2的序列设计扩增引物，以日本晴水稻基因组DNA为模板进行PCR扩增，加A连T载体转化大肠杆菌，选取正确的T载体阳性克隆提取质粒，用限制性内切酶SalI和SmaI对含目的片段的质粒和pCAMBIA1391质粒进行双酶切，分别回收目的片段和pCAMBIA1391质粒的大片段进行连接，用Progema T4连接酶连接目的片段和pCAMBIA1391载体大片段，4℃冰箱过夜连接16-18h，该连接产物即为超表达载体。