[发明专利]截短的轮状病毒VP8蛋白及其用途

说明书

本发明涉及一种截短的轮状病毒VP8蛋白，包含所述截短蛋白的融合蛋白，包含所述截短蛋白的缀合物，所述截短蛋白和融合蛋白的编码序列和制备方法，包含所述截短蛋白、融合蛋白或缀合物的药物组合物和疫苗，所述截短蛋白、融合蛋白、缀合物、药物组合物和疫苗可用于预防、减轻或治疗轮状病毒的感染及由轮状病毒的感染所导致的疾病，例如轮状病毒性胃肠炎和腹泻等。本发明还涉及上述截短蛋白、融合蛋白、缀合物用于制备药物组合物或疫苗的用途，所述药物组合物或疫苗用于预防、减轻或治疗轮状病毒的感染及由轮状病毒的感染所导致的疾病，例如轮状病毒性胃肠炎和腹泻等。

技术领域

本发明涉及生物化学、分子生物学、分子病毒学和免疫学领域。具体地，本发明涉及一种截短的轮状病毒VP8蛋白，包含所述截短蛋白的融合蛋白，包含所述截短蛋白的缀合物，所述截短蛋白和融合蛋白的编码序列和制备方法，包含所述截短蛋白、融合蛋白或缀合物的药物组合物和疫苗，所述截短蛋白、融合蛋白、缀合物、药物组合物和疫苗可用于预防、减轻或治疗轮状病毒的感染及由轮状病毒的感染所导致的疾病，例如轮状病毒性胃肠炎和腹泻等。本发明还涉及上述截短蛋白、融合蛋白、缀合物用于制备药物组合物或疫苗的用途，所述药物组合物或疫苗用于预防、减轻或治疗轮状病毒的感染及由轮状病毒的感染所导致的疾病，例如轮状病毒性胃肠炎和腹泻等。

背景技术

轮状病毒性腹泻，是全世界范围内婴幼儿最主要的急性肠道传染病，以腹泻和脱水为特征，死亡率高，造成了严重的社会负担和经济负担。全世界每年大约有1.1亿5岁以下儿童患轮状病毒性胃肠炎，其中200万儿童必须住院治疗，每年约453000儿童死于轮状病毒性腹泻，其中发展中国家和欠发达国家的死亡病例占总数的85％以上(LeBaron,C.W.etal.1990)。

感染轮状病毒(Rotavirus,RV)后，因脱水和电解质紊乱导致重症腹泻和死亡，目前尚无特效药物，临床治疗也只是对症治疗，因此，急需开发高效疫苗和治疗策略，以降低该病的发病率和死亡率，减轻该病所造成的社会和经济负担(Parashar,U.D.et al.2003)。

然而，目前已上市的两种轮状病毒疫苗：RotaTeq(Merk)和Rotarix(GSK)，在轮状病毒威胁最严重的地方，疫苗免疫效力却差强人意。同时，已报道，口服Rota Teq疫苗后可能发生严重腹泻以及疫苗株之间的分子重组；此外，RotaTeq和Rotarix与肠套叠的关联性并没有被排除(Lepage,P.et al.2007)。因此，本领域急需开发新一代替代疫苗，所述疫苗能够同时引起显著的细胞应答和体液应答，产生能够中和病毒感染性的抗体，从而可用于预防、减轻或治疗轮状病毒的感染及由轮状病毒的感染所导致的疾病。

在最近几年中，在轮状病毒的疫苗研发上，注意力已从灭活和减毒病毒疫苗转到基因工程疫苗。

轮状病毒(Rotavirus，RV)属于呼肠弧病毒科(Reoviridae)，其基因组由11节段的dsRNA组成，编码6个结构蛋白(VP1-4，VP6，VP7)和6个非结构蛋白(NSP1-6)。成熟的病毒粒子为三层衣壳结构，最外层由刺突状蛋白VP4和糖蛋白VP7组成(Bridger,J.C.etal.1976)。VP7与病毒在成熟的小肠上皮细胞中的复制直接相关。VP4蛋白不仅涉及RV的粘附、侵入，而且与RV血凝性、中和活性、毒力以及蛋白酶裂解后的感染性增强等理化特性相关。VP7和VP4都可独立地诱导病毒中和抗体，抗VP7和VP4的抗体都可阻止病毒的侵入。故VP7和VP4都成为疫苗开发的首选目标分子(Arias,C.F.et al.2002)。

VP8蛋白是RV病毒颗粒的最外层结构蛋白VP4(AA1-776)的一部分(AA1-231)。VP4经胰酶裂解后可形成VP8*和VP5*片段，而前者包含了VP4特异性的主要抗原表位(Clark,S.M.et al.1981)。这提示，可以利用VP8*蛋白来开发新型RV亚单位疫苗。

尽管已被分类为结构蛋白，现在已明确VP4在病毒入胞阶段行使重要功能。因此，VP4不仅在病毒结构中，而且在RV复制过程中起到了极其重要的作用(Arias,C.F.etal.1996)。