[发明专利]一种重复性好的血管紧张素转化酶检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种血管紧张素转化酶检测试剂盒。

背景技术

血管紧张素转化酶（Angiotensin-Converting Enzyme, ACE, EC 3.4.15.1，系统命名为肽酰二肽水解酶，是一种哺乳动物组织中普遍存在的，含锌离子的膜结合外肽酶（羧基端二肽），催化血管紧张素Ⅰ水解生成具有血管收缩作用的血管紧张素Ⅱ或水解具有血管收缩功能的缓激肽生成苯丙-精二肽，在食品和药品行业广泛使用。自 1898 年发现肾素以来，有关肾素-血管紧张素系（renin-angiotensin system, RAS 或 renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）和激肽释放酶-激肽系统（Kallikrein-Kinin System, KKS）的研究已进行了一百多年，这两个系统主要通过 ACE 对血压、电解质、体液平衡和心血管系统发育等控制而间接发挥作用，为此，RAS 和 KKS 在心脏和肾脏疾病中起着至关重要的作用，它所显示的作用和功能已远远超出了人们的设想。目前 ACEI（Angiotensin-Converting Enzyme inhibitors）已经成为急性心肌梗死和心力衰竭治疗的一类标准药物（如：卡托普利captopril、依那普利 enalapril、西拉普利 cilazapril、贝拉普利 cilazapril、赖诺普利 lisinopril、雷米普利 ramipril）。然而长期使用 ACEI 药物会出现咳嗽、肾功能减退、蛋白尿、高钾血症、低血压、肝功能异常、味觉和肠胃功能紊乱、皮疹、血管神经性水肿等不良反应。

1954年，Leonard T. Skeggs博士从马血浆中首次发现ACE，并发现此酶能催化血管紧张素Ⅰ水解去掉羧基端二肽（His-Leu）生成具有血管收缩作用的血管紧张素Ⅱ。Ng 和Vane发现体内的ACE催化循环系统（RAS 和 KKS）定位在肺中，此结果后来被很多研究验证。

2000年，在研究和寻找与心衰相关的新基因时，两个研究小组各自采用不同的方法从特发性扩张性心肌病病人的心脏标本和人淋巴瘤标本中克隆得到同 1 个新基因，并分别命名为ACE2和ACEH，随后统一称为 ACE2。它是迄今为止发现的ACE的第一个同类酶。在来源分布上，ACE在人体广泛分布，而ACE2 有一定的组织特异性，主要存在于心脏和肾脏的动脉、小动脉和小静脉，肾小管内皮，及肾内动脉和冠状动脉的平滑肌细胞及胃肠系统。Gembardt等报道ACE2在鼠的肺脏中也有存在。

ACE 通常以三种形式存在，它们是一个基因的不同剪接产物。异构体Ⅰ在组织中普遍存在，称为体细胞 ACE（somatic ACE, sACE），含有 1306 个氨基酸残基。异构体Ⅱ和异构体Ⅲ表达于睾丸组织和成熟的精子细胞中，称为睾丸 ACE（testic ACE, tACE），分别含有 732个氨基酸和 739 个氨基酸残基。ACE2 由 805 个氨基酸组成，表观分子量 120×103Da，其中包括 1 个由 17 个氨基酸组成的 N-末端信号肽区，1 个位于 274~378 位氨基酸的金属蛋白酶锌结合区 HEXXH 和 1 个锚定在细胞膜上的 C-末端。ACE2 与 ACE 在金属蛋白酶的催化结构域约有 42%的同源性。sACE 由 1306 个氨基酸组成，表观分子量 149×103Da，其中包括 N端信号肽30个氨基酸、两个同源的催化活性中心（N-catalytic domain）和（C-catalyticdomain）、亲脂跨膜区1257~1276位氨基酸和细胞内结构域组成。tACE由732个氨基酸组成，只含1个催化活性中心，其中异构体Ⅱ表观分子量为80×103Da，异构体Ⅱ表观分子量83×103Da。异构体Ⅱ除了信号肽和N端与sACE 稍有差异，从68个氨基酸残基开始，它们的序列完全相同。异构体Ⅲ与异构体Ⅱ的N完全相同，但第657个氨基酸开始就有所差异。

目前测定血清 ACE的方法有放射性核素法、分光光度法、荧光法、毛细管胶束电动色谱法。放射性核素法易受放射性核素的污染，不适于医院常规应用。分光光度法操作繁琐, 无法用于临床日常测定。荧光法、毛细管胶束电动色谱法由于受到设备限制, 无法广泛应用。用高效液相色谱法测定组织 ACE酶活性, 敏感性和特异性大大高于常用的紫外分光光度法。但是由于受设备限制, 推广难度较大。