[发明专利]桂花花序不同发育时期荧光定量内参基因及应用

说明书

本发明公开了桂花花序不同发育时期荧光定量内参基因及应用，所述内参基因为OfACT和OfEF1α；其中，所述内参基因OfACT的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示，内参基因OfEF1α的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示。本发明桂花花序不同发育时期荧光定量内参基因OfACT和OfEF1α基因是桂花不同发育时期花序中表达最稳定的两个内参基因，该两个基因表达的稳定性优于现有技术中的其他基因，作为荧光定量内参基因能为桂花不同发育时期花序中获得功能基因表达的精确定量数据提供有力支持。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及桂花花序不同发育时期荧光定量内参基因及应用。

背景技术

桂花(Osmanthus fragrans Lour.)是我国十大传统名花之一，也是我国重要的园林植物之一。根据花期桂花可分为秋桂和四季桂两大类，秋桂又可根据花色分为金桂(Luteus group，黄色至金黄色系)、银桂(Albus group，黄白色至黄色系)和丹桂(Aurantiacus group，橙色至橙红色系)品种群。导致秋桂不同品种群花色差异的分子机制一直是科学家们感兴趣的领域。

对于桂花不同花色品种，类胡萝卜素的种类及其含量是决定其花色呈现的最主要因素。参与调控类胡萝卜素代谢的相关基因的表达分析试验，是近年来研究秋桂不同品种群花色差异的分子机制的重要手段，因此研究者常利用实时荧光定量PCR技术研究不同花色品种群桂花不同发育时期花序中胡萝卜素代谢的相关基因的表达水平。

荧光实时定量PCR(qRT-PCR)由于其敏感性高及特异性好被广泛应用于基因表达研究，而其结果的准确性在很大程度上取决于内参基因的稳定性。理想的内参基因应该在不同的基因型、不同发育阶段、不同组织器官和不同胁迫条件下恒定表达，但事实上这样的理想内参基因根本不会存在。因此，需要根据不同物种及不同试验条件筛选合适的内参基因，这对获得准确的qRT-PCR实验结果是非常重要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是筛选出桂花不同发育时期花序中表达最稳定的内参基因，能为桂花不同发育时期花序中获得功能基因表达的精确定量数据提供有力支持。

桂花花序不同发育时期荧光定量内参基因，所述内参基因为OfACT和OfEF1α；其中，所述内参基因OfACT的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示，内参基因OfEF1α的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示。

本发明所述的桂花花序不同发育时期荧光定量内参基因，其中所述OfACT基因的特异性引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示，所述OfEF1α基因的特异性引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。

OfACT基因的特异性引物为：

OfACT-F：5′-CCCAAGGCAAACAGAGAAAAAAT-3′

OfACT-R：5′-ACCCCATCACCAGAATCAAGAA-3′；

OfEF1α基因的特异性引物为：

OfEF1α-F：5′-CGTTTGCCACTTCAGGATGTCTA-3′

OfEF1α-R：5′-GTACCAGGTTTCAGGACTCCAGTTT-3′。

本发明所述的内参基因OfACT和OfEF1α在相对定量法实时荧光定量PCR中的应用，桂花不同发育时期花序中功能基因表达试验中采用内参基因定量，所述桂花OfACT和OfEF1α基因在相对定量法实时荧光定量PCR中作为内参基因使用。

本发明内参基因的具体筛选步骤为：