[发明专利]采用谷氨酸钠耐受性模型筛选达托霉素高产菌株的方法

权利要求书

1.采用谷氨酸钠耐受性模型筛选达托霉素高产菌株的方法，包括如下步骤：

（1）初筛：将诱变处理的玫瑰孢链霉菌单孢子悬浮液稀释后涂布于含有谷氨酸钠耐受量为150—200 g/L的分离培养基上，在30℃培养箱中培养7—10天，挑选耐谷氨酸钠的单菌落接种于斜面培养基上，30℃培养7—10天，斜面产孢后接种于种子培养基中，30℃培养48h后接种于含谷氨酸钠量不同的发酵培养基，30℃培养168h后测定效价，挑选出效价高的菌株；

（2）复筛：将效价较高的菌株接种于种子培养基中，30℃培养48h后，挑选菌丝生长良好的菌株接种于含谷氨酸钠量不同的发酵培养基中，30℃培养168h后测定效价；

（3）发酵培养基试验：将效价较高的菌株进行发酵培养基试验，将（2）中培养好的种子接到含谷氨酸钠量不同的的发酵培养基中，接种量为5%，V/V，30℃培养168h后测定效价，挑选出效价高的菌株即成，或者将（2）中培养好的种子接到含谷氨酸钠量为3或5或10或15 g/L的发酵培养基中，接种量为5%，V/V，30℃培养168h后即成。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的（1）步骤中所用分离培养基成分和含量为：可溶性淀粉20.0 g/L，硫酸镁1.0 g/L，硝酸钾1.0 g/L，硫酸亚铁0.01 g/L，氯化钠0.5 g/L，磷酸氢二钾0.5 g/L，谷氨酸钠150 g/L，琼脂15.0 g/L ，pH7.2—7.4。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的（1）步骤中所用斜面培养基成分和含量为：可溶性淀粉20.0 g/L，硫酸镁1.0 g/L，硝酸钾1.0 g/L，硫酸亚铁0.01 g/L，氯化钠0.5 g/L，磷酸氢二钾0.5 g/L，琼脂15.0 g/L， pH7.2—7.4。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的（1）、（2）和（3）步骤中所用的种子培养基成分和含量为：糊精15 g/L，葡萄糖5 g/L，花生饼粉5 g/L，酵母粉5 g/L，蛋白胨5 g/L，磷酸氢二钾 0.5 g/L，硫酸镁0.2 g/L，硫酸亚铁0.004 g/L ，pH7.5 。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的（1）、（2）和（3）步骤中所用的含谷氨酸钠量不同的发酵培养基含谷氨酸钠分别为3.0 —15 g/L中之一，其他成分和含量均为：糊精35 g/L，葡萄糖5 g/L ，黄豆饼粉22 g/L，硫酸钾5 g/L， pH7.5。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于含谷氨酸钠量不同的发酵培养基含谷氨酸钠分别为5.0 —15 g/L中之一。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述诱变处理为将出发菌株玫瑰孢链霉菌成熟斜面用生理盐水制成单孢子悬液，经振荡，玻璃珠分散15min，无菌过滤收集单孢子悬液约5ml于无菌培养皿中，使其孢子的终浓度达到10⁶—10⁷ 个/ml，紫外功率30W，灯距35cm照射60s。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述诱变处理为将出发菌株玫瑰孢链霉菌成熟斜面用PH7.0的磷酸钾缓冲液制成单孢子悬液，经振荡，玻璃珠分散15min，无菌过滤收集单孢子悬液约5ml，使其孢子的终浓度达到10⁶—10⁷ 个/ml，加入烷化剂甲基磺酸乙酯EMS，终浓度为5% ，振荡处理45min，加入硫代硫酸钠终止反应，振荡10min。