[发明专利]一种基于多肽的玉米赤霉烯酮抗体模拟物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种可作为玉米赤霉烯酮抗体模拟物的十二肽及其应用。

背景技术

玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)是由镰刀菌产生的一种类雌激素样真菌毒素，其化学名为6-(10-羟基-6氧基-十一碳烯基)β-雷锁酸内酯，广泛存在于霉变的玉米、高粱、小麦、燕麦、大麦等谷类作物以及奶中。由于ZEN在谷物粮食中污染普遍，可通过食物链的作用对家禽及人体健康产生毒害作用，因此对ZEN的监测就显得尤为重要。

目前比较常用的检测ZEN的方法主要包括：高效液相色谱法(High performance liquid chromatography，HPLC)，气相色谱法(Gaschromatography，GC)，薄层层析法(Thin layer chromatography，TLC)，高效液相色谱-质谱联用法(High performance liquid chromatography-mass sepectrum，HPLC-MS)，微生物检测法和免疫检测法等，其中免疫学分析方法以其灵敏度高、操作简单以及可实现规模化筛选等优点，在ZEN的快速检测领域中得到了广泛的应用。

免疫学分析方法的核心在于抗原-抗体间的特异性识别及结合，因此制备特异性结合抗原的抗体就成为发展免疫学分析方法的前提与核心。抗体的研究近年来发展迅猛，已经从传统的多克隆、单克隆抗体，发展至以单链抗体、噬菌体展示抗体、单域重链抗体、抗独特型抗体等为代表的基因工程抗体领域。新型抗体具有分子量小、结构简单、可自我进化、制备快捷的特点及发展趋势。例如，单克隆抗体、单链抗体、单域重链抗体的分子量逐渐减少，分别为150、30-50、15-20kDa，以Lipocalin为骨架蛋白的抗体类似物为18-20kDa，而核酸适配体则仅为一小段核酸序列。

随着噬菌体展示多肽库技术的迅速发展，通过噬菌体展示肽库的淘选，可快速、简单地获得与特定靶体分子特异性结合的多肽分子，因此，多肽分子可成为传统抗体的替代物并应用于免疫学分析体系。噬菌体展示肽库技术的主要特点是可有效地筛选出与目标靶体特异结合的噬菌体展示多肽，该技术在探索受体与配体之间相互作用结合位点、寻求高亲和力生物活性的配体分子、探索未知蛋白质空间结构表位、新型疫苗的研制等方面应用广泛，但是上述噬菌体展示多肽技术的应用大多局限于以大分子蛋白质为靶体分子进行亲和淘选。由于蛋白质表面具有多个拷贝的表位，因此非常容易获得与之对应结合的多肽分子。目前的多肽分子大多作为抗原的模拟表位(抗原替代物)应用于免疫学分析中，而将多肽分子作为小分子物质抗体的替代物应用于免疫学分析的报道较少，其原因在于，小分子物质体积过小，且表面没有丰富的氨基、羧基基团，难以与多肽分子结合，从而造成淘选困难。

本发明通过噬菌体展示多肽库技术，采用磁珠液相亲和淘选并结合ZEN抗体竞争性洗脱的方式，通过优化孵育、洗脱时间，温度等条件，从噬菌体展示多肽库中快速筛选到能与ZEN特异性结合的多肽分子，该多肽分子具有与传统的ZEN单克隆抗体分子相似的免疫学检测特性，可作为传统ZEN抗体的替代物应用于ZEN的免疫学分析体系。该方法避免了制备传统的单克隆抗体分子所需要经过周期长的免疫过程、细胞融合、单克隆筛选等流程，具有无需免疫过程、筛选方便、周期短、制备成本低等特点。

发明内容

本发明以ZEN全抗原(ZEN与牛血清白蛋白的偶联物ZEN-BSA)为靶分子，将靶分子结合到磁珠上，投入噬菌体随机展示十二肽库，进行磁珠液相亲和淘选，结合ZEN抗体竞争性洗脱的方式，优化淘选、洗脱时间及温度等条件，获得了一种可特异性结合ZEN的多肽分子，其氨基酸序列为：SSILMKLRPLKH。

上述多肽分子结构中，大写英文字母分别代表已知天然L-型氨基酸残基或其D-型异构体的一种，即S代表丝氨酸残基，I代表异亮氨酸残基，L代表亮氨酸残基，M代表甲硫氨酸残基，K代表赖氨酸残基，R代表精氨酸残基，P代表脯氨酸残基，H代表组氨酸残基。

本发明还涉及编码上述多肽分子氨基酸序列的核苷酸，其序列为:

TCT TCT ATT CTT ATG AAG CTT AGG CCT CTT AAG CAT