[发明专利]一种地中海贫血基因的条码化磁珠液相芯片检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种地中海贫血基因的条码化磁珠液相芯片检测试剂盒，该试剂盒包括扩增地中海贫血基因的PCR试剂和检测地中海贫血基因的杂交试剂，其中，所述杂交试剂包括液相芯片；所述液相芯片由偶联有特异性杂交探针的条码化磁珠、空白条码化磁珠、游离的杂交阳性反序探针和杂交缓冲液组成。本发明具有操作简单、反应快、通量高、数字化的优点。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种地中海贫血基因的条码化磁珠液相芯片检测试剂盒。

背景技术

地中海贫血又称海洋性贫血，简称地贫，是世界上最常见的人类单基因遗传性血液病，是一组由于珠蛋白基因缺失或点突变，使血红蛋白中珠蛋白肽链合成减少或不能合成所致的遗传性溶血性贫血。我国长江以南各省发病率较高，其中以广东、广西、四川、云南、海南、香港、台湾较为多见，在北方则少见。

地中海贫血病由于珠蛋白缺失的多样性所致(缺乏的珠蛋白链的类型、数量不一)，临床表现呈多样性，症状的轻重程度也不同。有的胎儿及婴幼儿即因患极重的溶血性贫血致死，有的患者需要进行反复输血治疗，也有的患者虽血红蛋白异常而一生无任何临床症状的。如夫妻为同型地中海贫血携带者，则其子女有1/4机会患重型地中海贫血。世界上约有4.83％的人口携带珠蛋白变异基因，我国发病率较高的广西人群中地中海贫血基因携带率为12.22％～23.02％。由于地中海贫血的患者缺少正常的血红蛋白，红血球携氧能力差，体内主要造血器官骨髓与次要造血器官肝脏、脾脏均会进行旺盛的造血作用，但造出的红血球也多半品质不佳，容易被破坏，成为恶性循环。骨髓增生会侵犯周围的皮质骨，使骨骼变的脆弱。旺盛的造血作用会消耗极多的养分与能量，使身体其他部位的养分供需失调。目前尚无针对地中海贫血的有效的治疗方法，不断的输血虽然可以改善贫血的症状，也可避免过度的造血作用，但血红蛋白中的铁质会过度累积在身体中，并堆积至各重要器官造成器官病变，而且输血治疗费用昂贵，给患者及家庭带来巨大的经济负担和精神痛苦。因此遗传咨询、产前诊断以及在我国南方开展大范围人群的分子筛查作为防治该疾病的首要途径，对控制重型地贫患儿的出生，提高出生人口素质具有重要意义。

人体血浆中正常的血红蛋白由两对不同的珠蛋白肽链(α链和非α链)组成，非α链有β、γ、δ、ξ(结构与α链相似)及ε5种。珠蛋白的这几种肽链分别由其相应的基因编码，这些基因的缺失或点突变可造成各种肽链的合成障碍，致使血红蛋白的组分改变。根据本病缺乏的珠蛋白链的种类及缺乏程度，通常将地中海贫血分为α、β、δ和δ等4种类型，其中以β和α地中海贫血最多见，也最严重。

现在对地中海贫血的基因检测手段有Southern blotting印迹杂交、PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)连锁分析技术、PCR-单链构象多态性检测(PCR-SSCP)、等位基因特异性寡核苷酸(ASO)技术、反向点杂交法(RDB)、突变寡核苷酸延伸扩增(MOEA)、多重等位基因特异性PCR法(MAS-PCR)、跨越断裂点PCR法(Gap-PCR)、荧光PCR、基因芯片等。目前临床使用的方法主要为反向点杂交法(RDB)结合跨越断裂点PCR(Gap-PCR)电泳法，但其存在通量低、操作繁琐、耗时长和需人工判读等弊端。基于Luminex液相芯片建立的检测方法能极大改善此局面，可是该系统的微球是由荧光染料混合而成，通过荧光对微球进行区分，由于微球对光敏感，易发生光漂白，而且基于Luminex液相芯片建立的检测方法还存在微球的荧光染料与藻红蛋白荧光信号互相干扰的问题。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种地中海贫血基因的条码化磁珠液相芯片检测试剂盒。本发明使用条码化磁珠(BMB)的IntelliplexTM技术在可见光下识别磁珠上微蚀刻的条码，对磁珠进行解码分类，由于条码化磁珠本身不含有荧光物质，从而有效地解决了Luminex平台存在的问题。