[发明专利]一种植物核糖体的制备方法

权利要求书

1.一种植物核糖体的制备方法，其特征在于包括麦胚的制备、核糖体麦胚抽提物的制备步骤，具体包括：

A、麦胚的制备：取小麦种子，干燥至含水量12%，粉碎过孔径1mm筛，再过孔径0.45mm筛，收集0.45mm筛上的麦粉颗粒，加入麦粉颗粒固液体积比2~5倍的悬浮液，悬浮液为环己烷-四氯化碳溶液，悬浮得到悬浮颗粒，去除溶剂后挑选完整麦胚，完整麦胚进一步洗涤，洗涤后加入固液体积比8~12倍的无菌水，置于摇床上于温度3~5℃晃摇洗涤8~12min，洗涤2~4次，加入固液体积比1~3倍的裂解液，裂解液为NP-40，超声处理，弃去裂解液，加入固液体积比8~12倍的DEPC处理水于摇床上震摇处理8~12min，处理2~4次，干燥，于3~5℃保存备用；

B、核糖体麦胚抽提物的制备：称取A步骤制备的麦胚0.05~0.15g，置于DEPC处理过的离心管中，加液氮，研磨成粉末，加入0.5~1.5ml的核糖体抽提缓冲液和8~12μl购于promega公司的标准混合氨基酸，混摇使粉末分散，置于频率30Hz的振荡器上震荡抽提20~40s，于0~5℃静置2~4min，于3~5℃、30000g离心20~40min，上清液上Sephadex G-25柱，用1×Buffer A洗脱，以1.5ml/管或0.5ml/管依次收集洗脱液，并将洗脱液于3~5℃、30000xg离心8~12min纯化处理，测定各管洗脱液260nm和280nm紫外吸收值，作洗脱曲线，以吸收峰作为不同组分的依据，对相应峰的洗脱液通过琼脂糖电泳和氯仿/酚法去蛋白后核酸琼脂电泳，鉴定洗脱液，确定含核糖体的麦胚抽提物并收集，得到目标物，置液氮中保存备用；所述核糖体抽提缓冲液为2×BufferA，配方具体为：40mM Hepes/KOH、120mM K(AC)₂、5mM Mg(AC)₂、2mM CaCl₂、4mM DTT；所述1×Buffer A是核糖体抽提缓冲液2×Buffer A的倍比稀释。

2.根据权利要求1所述植物核糖体的制备方法，其特征在于所述环己烷-四氯化碳溶液的体积配比为2:5。

3.根据权利要求1所述植物核糖体的制备方法，其特征在于所述裂解液的浓度为0.5%。

4.根据权利要求1所述植物核糖体的制备方法，其特征在于A步骤所述超声处理是通过20~40Hz超声处理2~4min。