[发明专利]擎天树发芽种子的组培繁殖方法

说明书

技术领域

    本发明涉及植物无性快繁技术领域，具体地说是一种擎天树发芽种子的组培繁殖方法。

背景技术

擎天树（Parashorea chinensis Wang Hsie.），龙脑香科柳桉属，常绿高大乔木，为亚洲热带雨林中最繁茂、 最具代表性的树种。 树干可高达五六十米， 雄居林冠之上，木材坚硬、耐腐性强，木材纹理直，结构均匀，加工容易，刨切面光滑，花纹美观，为制造各种家具的高级用材，具有重要经济价值和科学研究价值，是国之瑰宝。擎天树分布狭窄，只分布在西双版纳的补蚌和广纳里新寨至景飘一带的20平方公里范围内；生长环境大部分为原始沟谷雨林及山地雨林，多成片生长，组成独立的群落，形成奇特的自然景观，是中国的一级保护植物。

擎天树开花结实较晚，一般在胸径达40厘米以上才开花结实，结实稀少，且每隔2-5年才开花结实1次，落果严重，不易采种。擎天树的种子发芽很快，在林地上l-4 d便发芽，在高温多雨环境，有些成熟果尚在母树上，种子就已发芽，严重影响着苗木培育的成功率。擎天树若采用嫩枝扦插或硬枝扦插无性繁殖技术，季节性强，扦插成活率70 %以上的时间是在每年的3月至7月。由于擎天树枝条内含酚类物质，嫩枝扦插褐化严重，硬枝扦插不定根发生时间长，如遇上干旱或高温梅雨恶劣气候条件，擎天树枝条容易干枯或腐烂致死。因擎天树生物特性特异，严重限制着该资源的开发利用。采用组培无性繁殖技术是促进擎天树发展的有效途径。由于擎天树幼嫩茎段密布绒毛，灭菌难度大。为了获取擎天树组培快繁繁殖体，探索擎天树发芽种子灭菌的方法尤为重要。

发明内容

本发明目的是为了保持种子生命力，提高增殖率，全年无间断生产苗木，提供一种擎天树发芽种子的组培繁殖方法。

本发明的方案是通过这样实现的：

一种擎天树发芽种子的组培繁殖方法，其特征在于：包括预处理、灭菌、初代培养工序，主要操作步骤为：

（1）预处理：将擎天树发芽种子的种翅去掉，用清水冲洗种子后，再剥除种壳，置于30-35 ℃无菌水内浸洗2-5 min，得到种胚备用；

（2）灭菌：将备用种胚置于质量浓度0.8-0.9 ‰升汞溶液中浸泡，用30-35 ℃无菌水清洗5-8次，得到灭菌种胚待培养；

（3）初代培养：将灭菌种胚接种到初代培养基中作一次初代培养，接种3d后种胚开始分株，胚轴伸长，接种20-30 h有褐化物质产生时，将种胚转接到新的初代培养基中作二次初代培养，转接2-3次，得到长有两对真叶，顶芽并带有一对托叶的组培苗。

以上所述的浸泡的时间为2-5 min。

以上所述的初代培养基配方的体积浓度为：MS + 80-120 mg/L肌醇 + 8-10 g/L卡拉胶 + 2-3 mg/L 6-BA + 0.5-1.5 mg/L NAA + 5-15 mg/L VC + 15-45 g/L蔗糖，pH6.0-7.0。

以上所述的初代培养控制光照强度为1500-3000 lux，光照时间为10-15 h/d，温度为25±3 ℃。

以上所述的初代培养基配方的体积浓度为：MS + 100 mg/L肌醇 + 9 g/L卡拉胶 + 2.5 mg/L 6-BA + 1.0 mg/L NAA + 15 mg/L VC + 30 g/L蔗糖，PH6.6。

以上所述的初代培养的条件为：光照强度2000 lux，光照时间12 h/d，温度25℃。

本发明具备以下的优点和积极效果：

（1）本发明采用0.8-0.9‰升汞溶液对擎天树种胚进行灭菌，既可以有效地杀死附着在外植体表面的细菌及真菌芽孢，又能防止种胚中毒，保持外植体的生命力，获取优质的无菌外植体。

（2）本发明在初代培养阶段，在接种20-30 h有褐化物质产生时，将种胚转接到新的培养基中培养，转接2-3次的培养，能有效预防种胚褐化，提高培养繁殖成功率，枯死率3-10%，无菌率70-94 %。

（3）本发明通过对初代培养基和培养条件的优化，肌醇促进胚状体和芽的形成，缩短培养时间，提高培养效率，同时在培养基中添加VC可以有效防止培养过程中的褐化现象。

（4）本发明方法操作过程简便，条件温和，培养周期短，增殖率高，可满足全年无间断生产苗木的要求，具有较好的经济效益和社会效益。

附图说明

图1为擎天树种胚用0.9 ‰升汞灭菌后接种在初代培养基上的状况图。

图2为种胚胚芽伸长状况图。