[发明专利]一种基于目标触发的双重信号扩增的探针及其应用

权利要求书

1.一种基于目标触发的双重信号扩增的探针，其特征在于，包括第一发夹、第二发夹和第三发夹；所述第一发夹、第二发夹以及第三发夹均为单链线形分子自身回折后，折叠区域内的互补碱基配对杂交而成，其局部区域形成双链结构的部分为茎干区，未形成双链结构并回折的部分为环状区；所述第一发夹包括：可特异性识别目标蛋白质的适配体区(Ⅰ)以及与所述适配体区(Ⅰ)部分杂交形成发夹结构的第一茎干区(Ⅱ)；

所述第二发夹包括：可与所述第一发夹的适配体区(Ⅰ)部分杂交的第一碱基互补区(Ⅰ’)、可与所述第一茎干区(Ⅱ)杂交的第二碱基互补区(Ⅱ’)，以及与所述第一碱基互补区(Ⅰ’)和第二碱基互补区(Ⅱ’)部分杂交形成发夹结构的第二茎干区(Ⅲ)；

所述第三发夹包括：可与所述第二茎干区(Ⅲ)部分杂交的第三碱基互补区(Ⅲ’)以及与所述第三碱基互补区(Ⅲ’)部分杂交形成发夹结构的G-四链体序列区(Ⅳ)。

2.根据权利要求1所述的基于目标触发的双重信号扩增的探针，其特征在于，所述第一茎干区(Ⅱ)和所述第二茎干区(Ⅲ)的3’末端为不被外切酶剪切的稳定序列。

3.根据权利要求1或2所述的基于目标触发的双重信号扩增的探针，其特征在于，所述第一茎干区(Ⅱ)的3’末端为从3’端开始的第1-4碱基为T-T-T-T；所述第二茎干区(Ⅲ)的3’末端为从3’端开始的第1-4碱基为T-T-A-A的序列。

4.根据权利要求1或2所述的基于目标触发的双重信号扩增的探针，其特征在于，所述第一茎干区(Ⅱ)的5’端部分序列与所述适配体区(Ⅰ)3’端连接形成所述第一发夹的环状区。

5.根据权利要求1或2所述的基于目标触发的双重信号扩增的探针，其特征在于，所述第一茎干区(Ⅱ)的5’端位于所述环状区的部分为从3’端开始的第1-4碱基为T-T-T-T的序列。

6.根据权利要求1或2所述的基于目标触发的双重信号扩增的探针，其特征在于，所述G-四链体序列区(Ⅳ)为如SEQ ID No.1所示的序列结构。

7.一种检测蛋白质分子的方法，其特征在于，利用权利要求1-6中任一所述的基于目标触发的双重信号扩增的探针进行检测。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

分别取所述的基于目标触发的双重信号扩增的探针和外切酶Ⅲ加入到待测溶液中，20-40℃下孵育80-100分钟，随后向其中加入氯化血红素和N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸缓冲液，20-40℃下孵育50-70分钟，然后向其中加入鲁米诺和H₂O₂，进行化学发光测量，观察或检测混合液的发光或变色情况。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，分别取所述的基于目标触发的双重信号扩增的探针和外切酶Ⅲ加入到待测溶液中，37℃下孵育90分钟，随后向其中加入氯化血红素和N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸缓冲液，30℃下孵育60分钟，然后向其中加入鲁米诺和H₂O₂，进行化学发光测量，观察或检测混合液的发光或变色情况。

10.权利要求1-6中任一所述的基于目标触发的双重信号扩增的探针在检测蛋白质分子或光电检测系统领域的用途。

11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述蛋白质分子为能与DNA结合的蛋白质。