[发明专利]靶向性重组PF4及其表达系统

说明书

本发明靶向性重组PF4及其表达系统，涉及一种与抑制肿瘤生长有关的重组肽，以及其真核表达载体。与抑制肿瘤生长相关的重组肽包括血小板因子四(PF4)47‑70肽段和环状RGD肽；将PF447‑70肽段和环状RGD肽连接构成靶向性重组PF4，并构建其真核表达质粒pcDNA3.1(+)‑PF447‑70‑RGD。该重组肽在体外能够抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖；其真核表达质粒在荷瘤裸鼠瘤体内能够抑制肿瘤生长。本发明为肿瘤治疗提供了新的有效的方法。

技术领域

本发明涉及一种抑制肿瘤生长的重组肽，将PF4^47-70与环状RGD肽连接构成靶向性重组PF4，并构建其表达系统，属于抗癌基因药物及其技术领域。

背景技术

血小板因子四是一种具有多种生物学功能的趋化因子，它能够通过抑制内皮细胞的增殖与迁移抑制血管生成，且其47-70肽段抑制活性最强。RGD肽是一类含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)序列的短肽,能够与肿瘤细胞表面高表达的整合素αvβ3结合，因此可作为肿瘤靶向肽进行肿瘤的诊断与治疗，且含有2个二硫键的环形RGD肽对肿瘤新生血管内皮细胞的抑制效力最强。而肿瘤的生长与转移依赖于血管的新生，因此抑制肿瘤血管生成已成为一种肿瘤治疗的策略。本发明就是将血小板因子四(PF4)47-70肽段和环状RGD肽巧妙的结合，构建成靶向性重组PF4。它能保证在抑制血管生成的作用下，增加靶向性，降低副作用，从而更有针对性的抗癌。

发明内容

本发明的目的是提供一种靶向性重组PF4。

本发明的第二个目的是提供一种靶向性重组PF4的基因序列。

本发明的第三个目的是提供一种靶向性重组PF4的DNA表达载体。

本发明的第四个目的是提供一种靶向性重组PF4的表达系统。

本发明的技术方案概述如下：

一种靶向性重组PF4，它同时包含PF4^47-70肽段和环状RGD肽的氨基酸序列；PF4^47-70肽段氨基酸序列为：NGRKICLDLQAPLYKKIIKKLLES；环状RGD肽氨基酸序列：ACDCRGDCFCG；具体结构为NGRKICLDLQAPLYKKIIKKLLES nX ACDCRGDCFCG或ACDCRGDCFCG nXNGRKICLDLQAPLYKKIIKKLLES；其中nX为连接肽，X是20种人体氨基酸中的一种或多种，n的个数为0至200。

具体而言，本发明的实施方案如下。

一方面，本发明提供一种靶向性重组PF4，其包含PF4^47-70肽段和环状RGD肽的氨基酸序列，所述PF4^47-70肽段的氨基酸序列为NGRKICLDLQAPLYKKIIKKLLES(SEQ ID NO:1)；所述环状RGD肽的氨基酸序列为ACDCRGDCFCG(SEQ ID NO:2)。

优选地，所述靶向性重组PF4中PF4^47-70肽段之间、环状RGD肽之间或PF4^47-70肽段与环状RGD肽之间用连接肽间隔开，并且具有如下所示的结构：

NGRKICLDLQAPLYKKIIKKLLES—X₁X₂…X_n—ACDCRGDCFCG或者ACDCRGDCFCG—X₁X₂…X_n—NGRKICLDLQAPLYKKIIKKLLES

其中，所述连接肽以X₁X₂…X_n表示，X₁至X_n各自独立地为20种人体氨基酸中的任一种，n为0至200的整数。