[发明专利]一种海洋光合细菌规模化生产方法

权利要求书

1.一种海洋光合细菌规模化生产方法，其特征在于包括需氧不需光发酵过程和光厌氧发酵过程两个阶段；首先是在需氧不需光的发酵过程中，海洋光合细菌菌种与需氧不需光发酵阶段培养基按1∶（5-20）的体积比混合后置于发酵容器中发酵，发酵温度为20-40℃，发酵时间为24-48小时，发酵液的溶氧分压为50%-100%饱和溶氧分压，发酵过程pH控制在6.3-8.0之间，细胞密度OD₆₆₀达0.8以上后停止发酵；第二阶段的光厌氧发酵过程中，将第一阶段发酵液按照1：（3–15）的体积比通入到透明无菌的管道中进行光厌氧发酵过程，发酵条件为：温度为15-40℃，发酵时间为2-15天，采用光厌氧培养基，发酵过程需要光照不需通气充氧，光强要求1200-8000lux之间，每天的光照时间在8-24小时；当菌体的浓度OD₆₆₀大于1.2，且OD₆₆₀每天的增长量小于0.1时，终止发酵；所述需氧不需光发酵阶段培养基的营养成分及质量百分比为：乙酸钠：0.15-0.5%、酵母粉：0.0001-0.5%、蛋白胨：0.001-0.5%、氯化铵：0.01-0.2%、糖：0.0001-2%、H₂PO₄^-：0.001-1%、Fe³⁺：0.00001-0.01%，培养基其余成分为无污染的海水或者人工海水，培养基的pH介于6.0-7.5之间，培养基接种发酵前需要经115-121℃高温灭菌20-30分钟；所述需氧不需光发酵过程在有光或无光条件下发酵；所述光厌氧培养基的成分及质量百分比为：乙酸钠：0.15-0.5%、酵母粉：0.0001-0.1%、蛋白胨：0.0001-0.1%、氯化铵：0.0001-0.1%、H₂PO₄^-：0.0001-0.01%、 Fe³⁺： 0.00001-0.001%，培养基其余成分为无污染的海水或人工海水，培养基pH 介于6.0-7.5之间。

2.根据权利要求1所述的海洋光合细菌规模化生产方法，其特征在于所述需氧不需光发酵过程的发酵容器为试管、三角烧瓶或发酵罐。

3.根据权利要求1所述的海洋光合细菌规模化生产方法，其特征在于所述光厌氧培养基需灭菌消毒，并保证灭菌后的培养基中的杂菌应低于3 cfu/ml，残留的游离氯应低于0.06 mg/L。

4.根据权利要求3所述所述的海洋光合细菌规模化生产方法，其特征在于所述灭菌消毒的方法为密闭不锈钢容器中煮沸30-60分钟，或者经高压灭菌设备110-121℃灭菌 20-30分钟，或利用含氯的消毒剂灭菌。

5.根据权利要求1所述所述的海洋光合细菌规模化生产方法，其特征在于所述透明管道为硬质或软质透明管道，耐压大于0.15兆帕。

6.根据权利要求1所述所述的海洋光合细菌规模化生产方法，其特征在于所述的透明管道需灭菌，其方法为使用管道体积1/5-1/20体积的3-5M的烧碱清洗管道30-60分钟，再经1/5-1/20体积的3-5M的乙酸清洗灭菌30-60分钟，最后用1/5-1/10体积的无菌水清洗30-60分钟；或者通过1/5-1/20体积的3-5M的烧碱清洗管道30-60分钟，再经1/5-1/20体积的3%-5%的过氧化氢清洗30-60分钟灭菌。