[发明专利]一种抗柑橘溃疡病菌的粘质沙雷氏菌菌株

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种抗柑橘溃疡病菌的粘质沙雷氏菌菌株，具体涉及一种粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)T861菌株，同时涉及该菌株在防治柑橘溃疡病菌方面的应用。

背景技术

柑橘溃疡病是由Xanthomonas axonopodis pv.Citri引起的一种检疫性病害，对柑橘的品质和产量造成严重影响，在世界上有柑橘作物生长的大部分地区均有所报道。柑橘溃疡病是一种细菌性病害，具有传染速度快、传播途径广、危害程度高、病症顽固难除的特点。尽管世界各国制定严格的规定，采取多种措施用以阻断溃疡病的传入，但是，农林产业结构调整和经济贸易的发展，仍加快了柑橘溃疡病的侵染步伐，感病面积逐年攀升，分布范围迅猛扩大，在亚洲、南美洲、非洲、印度洋群岛以及中东地区都有发生。

对于柑橘溃疡病的发现，各地区积极采取措施防治。在海湾地区及时通过产地检疫、隔离检疫和就地焚烧感病植株加强病害防控，病情得到有效的控制；但随后在阿根廷、澳大利亚、巴西、阿曼、沙特阿拉伯、留尼汪岛、美国和乌拉圭流行爆发，其中一些国家采取了一些试图根除柑橘溃疡病的措施，但是却以失败告终，而巴西、佛罗里达州和乌拉圭这些国家仍积极的为根除病害做着不懈努力。通常的溃疡病不会在一些干旱的柑橘属果树生长的地区发生，有的地方甚至已经根除了这种病害。但是，此病在其他地区广泛的发生继续威胁着柑橘产业，尤其是在那些无病区，加深对柑橘溃疡病的研究已经引起了全世界范围的重视。Rossetti(1977)、Civerolo(1981)、Schoulties(1987)、Civerolo(1991)和Goto(1992)在他们的研究中都阐述了关于防治溃疡病的观点，但是他们的研究都是受到了特定区域的限制，对于今天这个有着深度交流的时代而言或许已经过时。化学防治、农业防治等方法防治柑橘溃疡病也日渐凸显出其对环境问题的影响以及对技术问题的要求，因此，生物防治有了更好的应用空间，利用生物防治的方法不仅可以解决农药残留、生态破坏、技术落后等一系列难题，其防治效果也比较明显。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗柑橘溃疡病菌的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)T861菌株，为柑橘溃疡病菌的生物防治提供新的微生物资源。

本发明所述的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)T861菌株，已于2015年04月10日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC M2015222。

本发明的菌株T861具有如下特性：

1、培养学方面的特性

本发明的菌株T861于30℃在LB固体培养基平板上生长，菌落呈乳白色不透明，有光泽，边缘规则，结合参见图1，有轻微气味。

2、形态学方面的特性

菌体为革兰氏阴性菌，周生鞭毛，无荚膜，无芽孢，呈短杆状。

3、生理生化特征

淀粉水解：阴性

纤维素分解：阴性

甲基红(M.R.)：阳性

乙酰甲基甲醇(V.P.)：阳性

过氧化氢酶：阴性

明胶液化：阳性

产硫化氢：阴性

硝酸盐还原：阳性

吲哚：阴性。

提取本发明菌株的细菌基因组DNA，16S rDNA片段采用通用引物27F/1492R进行PCR扩增，扩增片段由铂尚生物技术(上海)有限公司测序，测得的序列于NCBI上进行同源性比较。结果显示其16S rDNA序列与粘质沙门氏菌同源性最高，达到99％以上。经Biolog检测，拮抗菌株T861与Serratia marcescens相似性为0.535，远大于其他菌株相似度，符合鉴定条件。通过形态观察和ITS序列分子鉴定，确定本发明菌株为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的一新种，命名为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)T861菌株。

将本发明的菌株T861以4-5％接种重量接入LB液体培养基中发酵培养可制得发酵液，发酵培养条件为：温度28-37℃、pH 6.5-7.5、时间24-36h及转速180-200r/min，最佳发酵培养条件为：温度30℃、pH 7.0、时间24h及转速180r/min。该发酵液对柑橘溃疡病菌具有抑制作用，利用针刺法测得其无菌发酵液对柑橘溃疡病菌体外抑制率达到86.7％以上。

附图说明

图1是本发明菌株T861的单菌落图。