[发明专利]蛋白酶变体

权利要求书

1.一种产生具有蛋白酶活性并且当与野生型亲本蛋白酶相比时具有改善的热稳定性的蛋白酶变体的方法，所述方法包括培养细胞，该细胞导入了包含下述可操作地连接的元件的表达载体：

(a)转录启动子，

(b)多核苷酸分子，其编码蛋白酶变体，所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:2的氨基酸1至177中所示的蛋白酶相比至少75％同一性，并且与SEQ ID NO:2的氨基酸1至177相比在选自下述的至少一个位置包含至少一个修饰：27、79、82、87、112、142、2、5、6、8、26、41、43、46、49、53、54、73、88、104、114、115、116、126、152、157、158和173，

该多核苷酸分子通过将至少一个突变导入编码蛋白酶的DNA分子而制备，和

(c)转录终止子，

由此，所述细胞表达由所述多核苷酸分子编码的蛋白酶变体；和回收所述蛋白酶变体。

2.权利要求1的方法，其中由所述多核苷酸分子编码的蛋白酶变体包含至少一个选自下组的修饰：A27K、A27G、A27V、Q53K、Q53R、T54R、D79K、D79L、D79M、Y82F、S87P、S87G、A112P、D142L、R2P、ΔS5、C6R、ΔG8、N26R、S41R、Y43F、T46R、S49R、A73C、P81R、N88R、D104R、D104P、T114P、S115R、T116V、T124L、T124V、A126V、M152R、S157K、Q158W和I173V。

3.权利要求1或2任一项的方法，其中由所述多核苷酸分子编码的蛋白酶变体包含至少一种下述的修饰的组合：

ΔS5/D79L/S87P、ΔS5/D79L/S87P/A112P/D142L、ΔS5/N26R/D79L/S87P/A112P/D142L、C6R/D79L/S87P、ΔG8/D79L/S87P、N26R/D79L/S87P、N26R/T46R/D79L/S87P/A112P/D142L、A27G/D79L/S87P/A112P/D142L、A27K/D79L/S87P/A112P/D142L、A27K/D79L/S87P/A112P/T124V/D142L、A27V/D79L/S87P/A112P/D142L、S41R/D79L/S87P、S41R/D79L/S87P/A112P/D142L、S41R/D79L/S87P/A112P/D142L/S157K、Y43F/D79L/S87P/A112P/D142L、T46R/D79L/S87P、T46R/D79L/S87P/A112P/D142L、T46R/D79L/S87P/T116V/D142L、S49R/D79L/S87P、Q53K/D79L/S87P/I173V、Q53R/D79L/S87P、T54R/D79L/S87P、D79L/S87P/A112P、D79L/P81R/S87P/A112P/D142L、D79L/S87P、D79L/S87P/A112P、D79L/S87P/A112P/D142L、D79L/S87P/A112P/D142L/S157K、D79L/S87P/A112P/T124L/D142L、D79L/S87P/A112P/T124V/A126V/D142L、D79L/S87P/A112P/T124V/D142L、D79L/S87P/D104R、D79L/S87P/D142L、D79L/S87P/N88R、D79L/S87P/Q158W、D79L/S87P/S115R、D79L/S87P/S157K、D79L/S87P/T114P、D79L/S87P/T116V、D79L/Y82F/S87P/A112P/T124V/D142L、D79L/Y82F/S87P/A112P/T124V/D142L、A27K/D79L/Y82F/S87G/D104P/A112P/A126V/D142L、A27K/Y82F/S87G/D104P/A112P/A126V/D142L、A27K/D79L/Y82F/D104P/A112P/A126V/D142L、A27K/Y82F/D104P/A112P/A126V/D142L。

4.权利要求1的方法，其中所述蛋白酶变体在至少一个选自下组的位置包含至少一个修饰：27、79、82、87、104、112、126和142。