[发明专利]用于急性早幼粒细胞白血病荧光检测的纳米探针及其制备方法

权利要求书

1.一种用于急性早幼粒细胞白血病荧光检测的纳米探针，其特征在于该纳米探针由能量给体和能量受体组成，所述的能量给体和能量受体通过π-π键相互作用结合在一起；所述的能量给体是一端带有氨基的探针DNA通过共价键键合的方式嫁接到表面羧基化后的具有核壳结构的上转换发光纳米晶上而形成的，所述的能量给体与能量受体的质量比为20:1~24:1；所述的能量受体为：单壁碳纳米角、氧化石墨烯或碳纳米管；所述的具有核壳结构的上转换发光纳米晶的表面羧基化率为：30%~60%；所述的探针DNA为：5’-NH₂-TCT CAA TGG CTG CCT CCC-3’；所述的带有氨基的探针DNA与所述的上转换发光纳米晶的摩尔比为：1:2000~1:2500。

2.根据权利要求1所述的用于急性早幼粒细胞白血病荧光检测的纳米探针的制备方法，其特征在于所述的具有核壳结构的上转换发光纳米晶为：NaYF₄:Yb,Er@NaYF₄、NaYF₄:Yb,Er@NaYF₄:Yb,Er、NaYF₄:Yb,Er@NaGdF₄或NaYF₄:Yb:Er@NaGdF₄:Yb,Er。

3.一种制备根据权利要求1或2所述的用于急性早幼粒细胞白血病荧光检测的方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.通过配体交换法将具有核壳结构的上转换发光纳米晶表面修饰上羧基，得到Cit-UCNPs；将该Cit-UCNPs经N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺活化，得到活化后的Cit-UCNPs；

b. 将步骤a所得活化后的Cit-UCNPs与探针DNADNA分子按照质量比260:1~290:1的比例溶于去离子水中，4℃搅拌10~12小时；经分离提纯得到能量给体即Cit-UCNPs-ssDNA；

c .将步骤b所得能量给体与能量受体按照质量比为20:1~24:1的比例溶于去离子水中，4℃搅拌1~2小时，最终得到急性早幼粒细胞白血病荧光检测的纳米探针。

4.根据权利要求3所述的用于急性早幼粒细胞白血病荧光检测的制备方法，其特征在于所述的步骤a的具体方法为：

(1) 将具有核壳结构的上转换发光纳米晶分散在甲苯和氯仿的混合溶剂中，其中，甲苯和氯仿的体积比为1:2~2:3；上转换发光纳米晶与混合溶剂的质量体积比为：1mg/mL~3mg/mL；

(2) 惰性气氛下，将无水柠檬酸钠溶于二乙二醇中配制成浓度为0.1388M~0.1735M的溶液，在100℃~120℃下保持30~40min，冷却；

(3) 将步骤(1)所得纳米晶溶液慢慢滴加到步骤(2)所得到的溶液中，加热至130℃，保持40~50min，蒸发除掉甲苯、氯仿，加热至180℃，氩气环境下，保持1~2小时，冷却、离心，用乙醇和水洗涤，即制得水溶性的Cit-UCNPs纳米晶；

(4)将N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺按照质量比1:1~3:1加入到1~3mL去离子水中，然后加入步骤(3)所得Cit-UCNPs纳米晶，4℃搅拌2~4小时，将所得到的混合物离心，用去离子水洗涤3次，得到活化的Cit-UCNPs纳米晶；

(5)将步骤(4)得到的Cit-UCNPs纳米晶与探针DNA分子按照质量比260:1~290:1的比例溶于去离子水中，4℃搅拌10~12小时；将所得到的混合物离心，用去离子水洗3次后得到能量给体即Cit-UCNPs-ssDNA。