[发明专利]一种鉴别雄性鞍带石斑鱼的方法

说明书

技术领域

本发明属于石斑鱼性别鉴别技术领域，具体涉及一种鉴别雄性鞍带石斑鱼的方法。

背景技术

鞍带石斑鱼又叫龙趸，鲈形目，鲈亚目，鮨科，石斑鱼亚科，石斑鱼属是石斑鱼中体型最大的一种。鞍带石斑鱼个体大、营养丰富、肉质鲜美，生长速度快，是人们喜爱的海水鱼珍品。近年来由于近岸滥捕，产量锐减，市场供不应求。在我国南方沿海广东、海南、福建、广西等地鞍带石斑鱼已成为海水养殖的主要对象，经济价值巨大。

鞍带石斑鱼性成熟缓慢而且存在性逆转现象，属于雌性先熟，雌雄同体鱼类。正是因为雌雄同体这一特性，因此在选育亲鱼时很难只从外观特征挑选出雄性亲鱼，由于这个原因导致鞍带石斑鱼亲鱼培育难度加大，成为鞍带石斑鱼育种工作的一个难题。

目前，判定雄性鞍带石斑鱼主要依据三点：体型和年龄的大小，看生殖孔位置，直接抽取性腺的方法。三种方法各有优缺点，根据体型和年龄的大小判断方便，时间短，操作简单，但是这种方法准确性低，人的主观性影响太大，同时饲喂方法，生长环境对其影响比较大。看生殖孔位置快捷，操作简单，对鱼无伤害，但是，非生殖期生殖孔往往变小微微缩进腹部这时候是很难以判断出雌雄的，准确性低。通过直接抽取性腺的方法判断准确性高，但是对鱼的伤害比较大，影响性腺发育成熟甚至造成死亡，同时操作繁琐，工作量大，判定时间长。

卵黄蛋白原(vitellogenin,Vtg)是特异存在于卵生非哺乳类性成熟动物血液中的一种蛋白，是卵黄蛋白(Yolk protein)的前体。作为一种重要的生殖蛋白参与卵生动物生殖、发育等重要生理过程。卵黄蛋白原被认为是一种理想的雌激素和类雌激素标志物。通常Vtg只能在繁殖期的雌鱼血浆中检测到，雄鱼和幼鱼体内含量十分微小。11-酮基睾酮(11-ketotestosterone,11-KT)，是鱼类中的一种重要雄性类固醇。由睾酮转化而来，睾酮转变为11p-羟基睾酮，后者再由11β-羟基类固醇脱氢酶催化形成11-KT，直接诱导鱼类精子生成。

在繁殖季节，雌雄鱼类这两种激素的含量会有较大差异。因此，本发明拟通过检测和比较这两种激素在血清中的含量进而鉴别出雄性鞍带石斑鱼。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鉴别雄性鞍带石斑鱼的方法，该方法快速高效，对鱼的伤害小，准确性高。

本发明的上述目的可以通过以下技术方案来实现：一种鉴别雄性鞍带石斑鱼的方法，包括以下步骤：

(1)选择鞍带石斑鱼：选择繁殖季节的鞍带石斑鱼；

(2)获取鞍带石斑鱼血清：选取鞍带石斑鱼尾静脉血液，离心后获得血清；

(3)测定血清中卵黄蛋白原含量：采用酶联免疫吸附法测定血清中的卵黄蛋白原含量：

(4)测定血清中11-酮基睾酮含量：采用酶联免疫吸附法测定血清中的11-酮基睾酮含量；

(5)鉴别鞍带石斑鱼雄鱼：结合鞍带石斑鱼血清中卵黄蛋白原含量和11-酮基睾酮含量，鉴别出鞍带石斑鱼雄鱼。

在上述鉴别雄性鞍带石斑鱼的方法中：

步骤(1)中选择体重在20kg以上的繁殖季节的鞍带石斑鱼，繁殖季节在南方沿海优选为每年的5～8月。

步骤(2)中优选选取鞍带石斑鱼尾静脉血液2～5mL，离心后获得血清。

步骤(2)中离心时离心机转速优选为3500～5000rpm，离心温度优选为4℃，离心时间优选为10～15min。

步骤(3)中采用酶联免疫吸附法测定血清中的卵黄蛋白原含量时，优选采用cayman chemical company的血清卵黄蛋白原含量测定试剂盒测定，具体的流程参照试剂盒的使用说明。

步骤(4)中采用酶联免疫吸附法测定血清中的11-酮基睾酮含量时，优选采用cayman chemical company的血清11-酮基睾酮含量测定试剂盒测定，具体的流程参照试剂盒的使用说明。

步骤(5)中当鞍带石斑鱼血清中卵黄蛋白原含量＜0.9mg/mL且11-酮基睾酮含量＞1ng/mL时，鉴别为鞍带石斑鱼雄鱼。

本发明具有如下优点：本发明方法通过同时测定鞍带石斑鱼血清中卵黄蛋白原含量和11-酮基睾酮含量进行雄性鞍带石斑鱼的鉴别，准确度高，简单易行，且对鱼体伤害小。

具体实施方式

实施例1

本实施例提供的一种鉴别鞍带石斑鱼雄鱼的方法，具体步骤如下：