[发明专利]一种用于快速检测唐氏综合征无重复片段的FISH探针、试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种用于快速检测唐氏综合征无重复片段的FISH探针，其特征在于，该FISH探针以人类全基因组为模板，利用105对特异性的引物对进行PCR扩增反应而得，所述105对引物对的序列为：

2.一种如权利要求1所述的用于快速检测唐氏综合征无重复片段的FISH探针的制备方法，其特征在于，该制备方法的步骤如下：

1)片段筛选：通过NCBI数据库检索21q22区片段，使用fliter屏蔽重复区段，得到非重复序列；

2)引物设计：将上述非重复序列导入引物设计软件对片段长度大于500bp的序列进行引物设计，设计引物扩增产物在574-2617bp之间，并人工合成105对特异性引物，序列为SEQIDNO.1-SEQIDNO.210；

3)PCR扩增：以人类基因组DNA为模板，结合上述105对特异性引物，分别在PCR体系中进行体外扩增，通过2％琼脂糖凝胶电泳对扩增产物片段进行分析，确认PCR的特异性的扩增产物；

4)克隆质粒的制备：将上述扩增产物纯化后得到目的产物，再将目的产物与载体pMD18-T连接，制备出包含目的片段的克隆质粒；

5)制备探针：以上述包含目的片段的克隆质粒为模板，制备荧光素标记的FISH探针。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所述PCR体系为：

PCR反应条件为：

95℃3分钟；

94℃30秒，58℃30秒，72℃45秒，40个循环；

72℃10分钟。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤5)探针的制备方法如下：以包含目的片段的质粒混合物为模板，使用荧光素标记的dUTP直接进行PCR扩增，将PCR产物标记荧光，避光、-20℃储存。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤5)所述的PCR扩增中PCR反应体系：

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤5)探针的制备方法如下：以包含目的片段的质粒混合物为模板，使用荧光素标记的dUTP利用切口平移方法进行反应，将质粒标记荧光，避光、-20℃储存。

7.如权利要求1所述的FISH探针在制备快速检测唐氏综合征的试剂或试剂盒中的应用。

8.一种试剂盒，包含权利要求1所述的FISH探针。