[发明专利]解淀粉芽孢杆菌JK6及生物肥和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物及其应用，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌JK6(Bacillus amyloliquefaciens)及应用。

背景技术

番茄青枯病是由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一种毁灭性土传病害，重病田发病率可高达80％以上，甚至造成绝收。目前，农业上对番茄青枯病主要依靠化学农药防治，效果均不理想，长期大量、不合理地施用化肥和化学农药，容易导致病原菌的耐药性、果蔬有毒化学物质残留量增加等问题。随着绿色农业的发展，逐渐转向以生物防治为主的综合防治，筛选高效拮抗菌株是生物防治的核心。研究表明能产生多种抗生素、具有广谱抑菌能力的解淀粉芽孢杆菌成为生物防治的重要研究对象。

全基因组测序快速发展以及对防病功能基因表达调控的研究，为探明生防菌株田间生防潜力提供了有力的技术方法。Okubara报道生防菌抗菌活性物质的合成与功能基因有关。B.amyloliquefaciens FZB42、FMB38、AS43.3的全基因组测序发现其均含有srfA、B、C、D，ituA、B、C、D，fenA、B、C、D，yndj，qk等多对防病功能基因，其发酵产物中也检测到多种抗生素，例如B.amyloliquefaciens FZB42能产surfactin、fengycin等抗生素，对尖孢镰刀菌、水稻纹枯病、灰霉病等有抑制作用；Christopher报道的B.amyloliquefaciens AS 43.3能产iturinA、bacillibactin等抗生素，可以有效防治赤霉病。Abdulwareth研究了Bacillus strain Am1、D16单独培养以及和青枯雷尔氏菌混合培养中ituC、srfAA、bacA、fenD等四个功能基因表达量的差异，结果表明：Bacillus strain D16和青枯雷尔氏菌混合培养液中，四个功能基因的表达量都增高；而Bacillus strain Am1和青枯雷尔氏菌混合培养液中，fenD的表达量下降，其余三个功能基因的表达量均增高；该结果表明Bacillus strain Am1、D16抑制青枯雷尔氏菌的效果与功能基因的表达情况密切相关。

虽然较多生防菌株已经报道含有多种防病功能基因，但在复杂的土壤环境因子中菌株能否成功定殖并大量表达还没有深入研究，土壤中功能基因表达量的定量检测方法尚待研究。本发明中的B.amyloliquefaciens JK6基因组中含有srfAB，ituA、B、C、D，fenD，yndJ等多种防病功能基因，并建立了利用RT-PCR技术研究菌株在土壤中功能基因表达的制备方法，结果证明施加了JK6菌剂的盆栽土中yndJ、srfAB、fenD、ituC等功能基因的拷贝数显著高于对照组，表明JK6菌株能够在土壤中大量定殖、繁殖，并成功表达多种功能基因，这些结果进一步确证菌株在土壤中生防潜力发挥。

发明内容

本发明的目的之一在于根据现有技术中上述问题，提供一种兼具防病与促生功能的解淀粉芽孢杆菌JK6。

本发明的第二个目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌JK6基因组为模板进行PCR扩增得到合成脂肽类抗生素的功能基因。

本发明的第三个目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌JK6的功能基因在土壤中表达的制备方法。

本发明的第四个目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌JK6的发酵液。

本发明的第五个目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌JK6发酵液的生物肥。

本发明的最后一个目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌JK6及生物肥的应用。

本发明的第一个目的是通过以下技术方案实现上述目的：

一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JK6，简称JK6菌。该菌株于2015年03月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号CGMCC No.10658，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

该JK6菌是在广州华南农业大学蔬菜基地的赤红壤中分离、纯化所得，目前已经在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码100101，其保藏编号为：CGMCC No.10658，保藏日期为2015年03月23日。