[发明专利]一种利用血清氧化巯基的性质诊断肝病的方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种诊断肝病的方法，所述方法是利用血清氧化巯基的性质进行的；具体涉及采用血清静息巯基氧化酶专一活力或血清氧化巯基总活力作为生物指标诊断肝病；本发明还涉及一种诊断肝病的试剂盒。

背景技术

常见的肝病有肝炎、肝硬化、原发性肝癌等。用于诊断肝病的血清指标很多，谷丙转氨酶、谷草转氨酶、甲胎蛋白、白蛋白与球蛋白比值是常用诊断指标。这些指标的敏感性与特异性均存在局限性，需要新的血清指标提高诊断效果。

静息巯基氧化酶可催化蛋白质中半胱氨酸残基上巯基形成二硫键，在此过程中，氧气形成过氧化氢。目前检测静息巯基氧化酶专一活力采用以Amplex超红(Amplex UltraRed，AUR)、辣根过氧化物酶、二硫苏糖醇、吐温为主要试剂的荧光法。利用该方法已在人和鼠血清检测到静息巯基氧化酶活力，但尚无用此检测方法诊断疾病的报道。血清可氧化巯基，除了静息巯基氧化酶的贡献，可能还存在其它大分子与小分子促进巯基氧化，可通过以二硫苏糖醇、二硫代二硝基苯甲酸、盐酸胍为主要试剂的比色法检测血清氧化巯基总活力，但尚无用此检测方法诊断疾病的报道。

发明内容

本发明涉及一种诊断肝病的方法，其特征在于，以血清氧化巯基的性质诊断肝病。使用本发明的方法诊断肝病能够有效提高诊断肝病的准确率；能够有效区分肝病与非肝疾病。

所述的肝病是指包括但不限于肝癌、乙型肝炎和肝硬化等肝病。所述的非肝疾病包括但不限于高血压、糖尿病、动脉粥样硬化、胃癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌等疾病。

所述的血清氧化巯基的性质可以通过检测血清静息巯基氧化酶专一活力来实现，使用荧光定量方法(也称荧光法)来测定；或者通过检测血清氧化巯基总活力来实现，使用比色定量方法(也称为比色法)来测定。

所述的荧光定量方法包括以下关键试剂：Amplex超红(Amplex UltraRed，AUR)、辣根过氧化物酶、二硫苏糖醇、吐温。

所述的比色定量方法包括以下关键试剂：二硫苏糖醇、二硫代二硝基苯甲酸、盐酸胍。

本发明中，无论血清静息巯基氧化酶专一活力还是血清氧化巯基总活力都能够作为生物指标诊断肝病，并且氧化巯基总活力更好，血清氧化巯基总活力能够进一步提高诊断肝病的准确率。而且，在其他非肝疾病中氧化巯基总活力基本不变化，能够与肝病区分开来。

本发明还涉及一种诊断肝病的试剂盒，其特征在于，包括检测血清氧化巯基的程度的试剂。

优选地，所述试剂是选自用于检测血清静息巯基氧化酶专一活力和血清氧化巯基总活力的试剂。

优选地，所述的肝病包括但不限于肝癌、乙型肝炎和肝硬化。

所述的试剂盒，其特征在于，包括用于检测静息巯基氧化酶专一活力的荧光定量法使用的Amplex超红(Amplex UltraRed，AUR)、辣根过氧化物酶、二硫苏糖醇和吐温；或者包括检测氧化巯基总活力的比色定量法使用的盐酸胍、二硫代二硝基苯甲酸和二硫苏糖醇。优选地，所述的试剂包括50mM磷酸盐缓冲液(pH7.5，含1mM EDTA)、25μM Amplex超红(Amplex UltraRed，AUR)、0.125μM辣根过氧化物酶、50μM二硫苏糖醇和1.25％吐温；或者包括6.6M盐酸胍溶液、10mM二硫代二硝基苯甲酸和1mM二硫苏糖醇。

更优选地，其中测定血清静息巯基氧化酶专一活力的反应体系为50mM磷酸盐缓冲液(pH7.5)包含1mM EDTA、10μM Amplex超红、0.05μM辣根过氧化物酶、50μM二硫苏糖醇和0.5％吐温；或者测定血清氧化巯基总活力的反应体系包括反应液为200mM HEPES缓冲液(pH7.5)包含1mM二硫苏糖醇、反应终止液为6.6M盐酸胍溶液(pH8.0)包含200mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、显色液为10mM二硫代二硝基苯甲酸。

本发明还涉及所述试剂盒的应用，用于检测血清指标，所述指标为血清静息巯基氧化酶专一活力和血清氧化巯基总活力。

附图说明

图1A-1F肝病患者血清指标。与健康对照比较，**P<0.01，***P<0.001。其中图1A为白蛋白/球蛋白；图1B为谷丙转氨酶；图1C为谷草转氨酶；图1D为甲胎蛋白；图1E为静息巯基氧化酶专一活力；图1F为氧化巯基总活力。

图2血清静息巯基氧化酶专一活力与血清氧化巯基总活力的相关性。