[发明专利]一种肠道病毒多重RT-PCR试剂盒

权利要求书

1.一种肠道病毒多重RT-PCR试剂盒，其特征在于：

本试剂盒包括M-MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、5xRT-PCR Buffer、阳性对照、阴性对照、随机引物、三对特异性引物、多重10xPCR Buffer、Taq酶；

依据肠道病毒基因保守序列5’端非编码区设计通用引物：

F1：5’-ACAAGCACTTCTGTTTCCCCGG-3’     22bp，

    F2：5’-GATTGTCACCATAAGCAGCCA-3’      21bp；

    依据EV71病毒VP1基因保守序列设计引物：

    EV71F：5’-AGARAGYTCTATAGGRGAYAG-3’   21bp，

    EV71R：5’-GGAGGGAGRTCTATCTCYCC-3’    20bp；

    依据CA16病毒VP1基因保守序列设计引物：

    CA16F：5’-AAGGGTAATGGARTGTGGTGAY-3’  22bp，

    CA16R：5’-GTGTGTGTTGAACCATCACTC-3’   21bp；

    其中：R=A或G，Y=C或T；

阳性对照：

连接有设计肠道病毒、EV71、CA16引物的基因保守序列的pGBKT-7克隆载体；

③阴性对照：

RNase Free H₂O；

④5×RT-PCR Buffer配制：

    Tris-HCl             250mM

    KCl                  375mM

    MgCl₂                                   15mM

    DTT                   50mM

    dNTP                  10mM

    配置混合后于冰箱-20℃保存；

⑤多重10×PCR Buffer配制：

       Tris-HCl                100mM

       KCl                     500mM

       MgCl₂                                         25mM

       dNTP                      2mM

       Nonidet P40             0.8％

       配置混合后于冰箱-20℃保存。