[发明专利]采用耐盐强化活性纳米垃圾堆肥调节盐胁迫草坪草保护酶的方法

权利要求书

1.一种强化纳米垃圾肥调节盐胁迫草坪草保护酶的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）将土壤与盐碱土过筛除杂，按一定比例制成轻度0.3%、中度0.6%和重度0.9%盐碱土，将混合好的盐碱土在121℃下灭菌30 min备用；

（2）将步骤（1）混合好的盐碱土和30-35nm纳米堆肥按59：1的比例混合并加入15ml强化耐盐微生物菌剂；所述的强化耐盐微生物菌剂NaCl的浓度以0.5%的梯度增加到3%；耐盐微生物指的是：枯草芽孢杆菌、赖氨酸芽孢杆菌和产黄青霉按体积比1:1:1的比例配制成；

（3）以混合好的步骤(2)的土壤基质进行草坪植物栽培试验，实验时基质用量为9400g·m^-2，草皮基质厚度为15 mm，高羊茅草种播种量为160g·m^-2，将种子浸泡24h后均匀播洒于基质表层，首先进行黑暗处理，充分浇水保证萌发，萌发后进行培养，光照强度为450-700μmol·m^-2·s^-1，期间早晚定期浇一次水，经常调换培养草皮的位置以保证光照一致，室内的相对湿度为40-55%，温度为20-25℃，实验进行50d后进行植物各指标的测定。

2.权利要求1所述强化纳米垃圾肥调节盐胁迫草坪草保护酶的方法，其中

（1）纳米堆肥的制备：

将生活垃圾堆肥105℃烘干至恒重，将垃圾堆肥加工研磨制成30-35nm纳米堆肥，备用；

（2）耐盐微生物菌剂的制备：

将堆肥样品称取10g置于无菌锥形瓶中，加入100mL无菌水振荡均匀后，取10mL悬浮液于盛有100mL富集培养基的锥形瓶中，在28℃，220r/min下振荡培养3d，即为混合微生物菌群；所述的混合微生物菌群中含有枯草芽孢杆菌、赖氨酸芽孢杆菌和产黄青霉；

（3）混合微生物菌群耐盐强化采用的是逐步增加盐浓度的方法，以减轻瞬间高浓度盐对混合菌株造成的冲击和毒害，NaCl的浓度以0.5%的梯度增加到3%，每增加一次NaCl的浓度，要待菌体增长量稳定后，才能继续增加NaCl的浓度，逐级驯化出耐盐微生物菌群；

（4）复合耐盐微生物菌剂的制备：

枯草芽孢杆菌、赖氨酸芽孢杆菌和产黄青霉按体积比1:1:1的比例配制成复合耐盐微生物菌剂，稀释100倍备用；

（5）草皮建植：

将土壤与盐碱土过筛除杂，按一定比例制成轻度0.3%、中度0.6%和重度0.9%盐碱土，将混合好的盐碱土在121℃下灭菌30 min备用；

每个胁迫设3个处理，三个胁迫所设处理相同，分别为:

1）以100%土壤为对照基质并加入15 ml空白培养基；

2）混合好的盐碱土和纳米堆肥按59：1的比例混合并加入15ml空白培养基；

3）混合好的盐碱土和纳米堆肥按59：1的比例混合并加入15ml强化耐盐微生物菌剂；

（6）以混合好的盐碱土为基质进行草坪植物栽培试验，实验时基质用量为9400g·m^-2，草皮基质厚度为15 mm，高羊茅草种播种量为160g·m^-2，将种子浸泡24h后均匀播洒于基质表层，首先进行黑暗处理，充分浇水保证萌发，萌发后进行培养，光照强度为450-700 μmol·m^-2·s^-1，期间早晚定期浇一次水，经常调换培养草皮的位置以保证光照一致，室内的相对湿度为40-55%，温度为20-25℃，实验进行50d后进行植物各指标的测定。