[发明专利]用于检测鸭腺病毒2型的引物对及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及禽病检测技术领域，具体涉及一种用于检测鸭腺病毒2型的引物对及试剂盒。

背景技术

腺病毒是全世界家禽和野禽常见的传染性原。国际病毒分类委员会（ICTV）已规定了腺病毒分类的基本特征，该报告将腺病毒分为哺乳动物腺病毒和禽腺病毒两个属。禽腺病毒在血清学上与哺乳动物腺病毒不同，基因结构也有差异。禽腺病毒分为I、II、III亚群，目前国内外专家学者对禽腺病毒的研究集中在I和III亚群。鸭腺病毒2型（Duckadenovirus2，DADV2）属于I亚群暂定种，最早是1977年匈牙利的J.F.Bouquet等在番鸭中分离出来的，它与已知的鸡和火鸡的病毒没有关系，但可在鸡和鸭的细胞中生长。（J.F.Bouqueta,Y.Moreau,J.B.McFerran&T.J.Connor，1982.Isolationandcharacterisationofanadenovirusisolatedfrommuscovyducks,AvianPathology,11:2,301-307）近年来相继在广东、浙江、福建地区发生了，造成了较大的经济损失。鸭腺病毒2型主要在番鸭呼吸道和消化中进行自我复制，在细胞中复制也会形成包涵体。病鸭表现为精神萎靡、沉郁、排浅黄白色粪便严重的甚至会死亡。病理症状为肝脏肿大，斑驳状出血、白色点状坏死，胰腺白点坏死，心包积水，法氏囊缩小等。鸭腺病毒2型传播方式包括垂直传播和水平传播，垂直传播由亲代传播到子代，水平传播则是通过粪便、饲料等进行传播。一般发病天龄在15-40之间，一旦传入鸭群，能够迅速感染鸭群，并且很难清除，鸭腺病毒2型对恶劣的环境有很强的抵抗能力。

常规的诊断方法依靠电镜、免疫染色或病毒分离。这些方法费时、费力且敏感性较差，一般需要时长要几天甚至更长时间，对试剂要求多，非特异性强。对于鸭腺病毒2型，目前国内没有报道相应的检测方法。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了鉴别鸭腺病毒2型的引物对。

该鉴别鸭腺病毒2型的引物对，其核苷酸序列如SEQIDNO:1~2所示。

该对引物是根据DADV2GR株（GenbankKJ469653.1）的高度保守区域52K基因设计的，通过实验发现，该引物对能够特异性鉴别鸭腺病毒2型，以该引物对进行PCR扩增，能够扩增出一条634bp的条带，其他病毒则无扩增序列。

本发明还提供一种鉴别鸭腺病毒2型的方法，是使用SEQIDNO:1~2所示的鉴别鸭腺病毒2型的引物对，以待检样品基因组为模板，进行PCR扩增，能够扩增出634b的基因片段产物，表明待检样品含有鸭腺病毒2型。

其中待检样品基因组抽提优选使用taco核酸自动抽提仪及配套试剂，抽提简便快速高效。

本发明还提供一种鉴别鸭腺病毒2型的PCR试剂盒，包括DNA聚合酶，SEQIDNO:1~2所示的引物对，dNTP的混合物和无菌双蒸水。

本发明还提供上述鉴别鸭腺病毒2型的PCR试剂盒使用时的反应程序，其特征在于，包括：95℃预变性5min；扩增：94℃变性30sec，53℃退火30sec，72℃延伸1min，共30个循环；最后72℃延伸10min。

扩增产物加到1%（质量百分比）琼脂糖凝胶中，将琼脂糖凝胶放入电泳仪中进行电泳约30min，在成像系统中观察结果，即可直观地看出待检样品中是否含有鸭腺病毒2型。

本发明具有以下有益效果：

本发明鉴别鸭腺病毒2型的引物对，特异性强，可准确高效地鉴别出待检样品是否含有鸭腺病毒2型，而包括禽腺病毒、细小病毒、坦布苏、新城疫等在内的禽类病毒并不能扩增出DNA片段。该引物对灵敏度高，至少能检测出0.2558ng的样品DNA。本发明的引物及PCR检测方法检测时间短，整个PCR过程只需要2个小时左右；简便、经济、不需要购买昂贵的实验仪器及试剂，有利于及时发现病鸭是否感染该病毒，采取相应措施，避免造成更大的经济损失。

附图说明

图1是实施例1中多个病料样品使用本发明引物对进行扩增后的电泳结果。

图2是实施例2中多种禽病毒与鸭腺病毒2型采用本发明引物对进行CR扩增后的电泳结果。

图3是实施例3中不同浓度鸭腺病毒2型采用本发明引物检测的灵敏度实验结果。

具体实施方式

实施例1

1．实验材料：