[发明专利]一种乳酸链球菌素发酵联产乳酸钙的方法

权利要求书

1.一种乳酸链球菌素发酵联产乳酸钙的方法，其特征在于，包括以下步骤：

①将活化好的乳酸链球菌种子液接入发酵培养基，开始发酵后，通过流加氢氧化钙悬浊液控制发酵液pH至6.0-7.0，发酵20-30h；

②发酵结束后，发酵液经过预处理、除菌、浓缩、干燥提取乳酸链球菌素；

③浓缩废液经过结晶、离心、干燥后提取乳酸钙；

步骤①中所述氢氧化钙悬浊液的浓度为10％-30％。

2.根据权利要求1所述的一种乳酸链球菌素发酵联产乳酸钙的方法，其特征在于，步骤①中所述活化步骤为：

(1)取保存于-80℃的乳酸链球菌甘油管在固体培养基上划线，29-30℃条件下培养12-20h，得单菌落；

(2)将步骤(1)中固体培养基上的单菌落接种于种子培养基中，于29-30℃条件下培养8-12h，得到活化好的乳酸链球菌种子液种子液。

3.根据权利要求2所述的一种乳酸链球菌素发酵联产乳酸钙的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的固体培养基成分为蔗糖0.6-2％，酵母膏0.3-2％，蛋白胨0.3-2％，KH₂PO₄ 0.9-2％，NaCl 0.5％，Mg SO₄ 0.01-0.2％，琼脂1.2-2％；

所述步骤(2)中的种子培养基成分为蔗糖0.6-2％，酵母膏0.3-2％，蛋白胨0.3-2％，KH₂PO₄ 0.9-2％，NaCl 0.5％，Mg SO₄ 0.01-0.2％。

4.根据权利要求1所述的一种乳酸链球菌素发酵联产乳酸钙的方法，其特征在于，

步骤①中所述的发酵培养基成分为：蔗糖20-35％，酵母膏9-15％，玉米浆1-2％，KH₂PO₄0.9-2％，NaCl 0.5％，Mg SO₄ 0.01-0.2％，吐温6-10％；

步骤①中所述氢氧化钙悬浊液的浓度为10％-30％，并且使用搅拌装置不断搅拌，保持混匀悬浮状态。

5.根据权利要求4所述的一种乳酸链球菌素发酵联产乳酸钙的方法，其特征在于，步骤①中所述氢氧化钙悬浊液的浓度为12％-16％。

6.根据权利要求1所述的一种乳酸链球菌素发酵联产乳酸钙的方法，其特征在于，

步骤②中所述预处理为调节发酵液pH至1.5-3.0，60-80℃保温30-60min；

步骤②中所述除菌的方式为陶瓷膜过滤或板框过滤；

步骤②中所述浓缩的方式为超滤膜浓缩；所述超滤膜浓缩时，浓缩回流一侧用于提取乳酸链球菌素，透过液一侧提取乳酸钙，所述透过液也即为浓缩废液；

步骤②中所述乳酸链球菌菌素的干燥提取方法为：将经过超滤浓缩后的透过液进行检测，待透过液一侧检测不到效价时，结束浓缩，收集回流液，进行喷雾干燥即得。

7.根据权利要求6所述的一种乳酸链球菌素发酵联产乳酸钙的方法，其特征在于，所述超滤膜为卷式膜，膜截留分子量为1000-2000DA。

8.根据权利要求1所述的一种乳酸链球菌素发酵联产乳酸钙的方法，其特征在于，

所述步骤③中乳酸钙的提取方法为：将经过超滤浓缩的浓缩透过液一侧，添加氢氧化钙调节PH至7.0-7.5，然后过滤掉不溶物，进行结晶操作，结晶完成后进行离心分离，即得乳酸钙的固体，进行干燥得到最终的乳酸钙产品。

9.根据权利要求8所述的一种乳酸链球菌素发酵联产乳酸钙的方法，其特征在于，

步骤③浓缩废液结晶的参数：控制结晶起始温度为50-80℃，乳酸钙浓度100-150g/L，温速率为5-10℃/h，降温至30℃以下，并且在结晶过程中一直维持搅拌转速100-200r/min。