[发明专利]一次性纳米电致化学发光双组份免疫传感器及其制备方法

权利要求书

1.一次性纳米电致化学发光双组份免疫传感器，其特征在于，为三电极结构，Ag/AgCl或饱和甘汞电极作为参比电极，Pt电极作为辅助电极，以背靠背放置的两片经过修饰而特异性识别两种组份的ITO导电玻璃作为双组份免疫传感器的工作电极；所述的工作电极为背靠背的两片ITO导电玻璃，两片ITO导电玻璃的表面分别由DMSA-CdTe QDs溶液和TiO₂-GSH-CdTe QDs复合物悬浊液涂覆并晾干形成的均匀发光体薄膜，在发光体薄膜上再覆盖壳聚糖薄膜，然后再依次以链霉亲和素、AFP和AFP-L3抗体修饰薄膜，以BSA封闭裸露的壳聚糖薄膜，待测对象AFP和AFP-L3抗原通过抗原抗体特异性反应分别交联到各自特异性识别的ITO玻璃表面，最后与辣根过氧化物酶标记的AFP和AFP-L3抗体交联获得双组份免疫传感器工作电极。

2.如权利要求1所述的一次性纳米电致化学发光双组份免疫传感器，其特征在于，所述的工作电极的制备方法为：

第一步：制备DMSA-CdTe QDs和GSH-CdTe QDs：通过CdCl₂作为前驱体提供Cd源，NaBH₄与Te粉反应得到的NaHTe作为前驱体提供Te源，在保护剂DMSA或GSH存在的水体系中，一步法合成获得DMSA-CdTe QDs或GSH-CdTe QDs；离心浓缩纯化；GSH-CdTe QDs与锐钛矿型TiO₂纳米粒子超声获得TiO₂-GSH-CdTe QDs复合物；

第二步：制备发光体薄膜：将DMSA-CdTe QDs溶液和TiO₂-GSH-CdTe QDs复合物悬浊液分别滴涂在两片ITO电极表面，室温晾干，获得均匀发光体薄膜；

第三步：制备壳聚糖薄膜：在发光体薄膜上分别覆盖壳聚糖溶液，室温晾干；而后使用戊二醛溶液室温活化壳聚糖薄膜；

第四步：链霉亲和素修饰：用洗液慢慢将戊二醛溶液冲洗完全，链酶亲和素滴涂在壳聚糖薄膜表面，室温下反应，而后4 ^oC下过夜；

第五步：AFP和AFP-L3抗体修饰：用洗液慢慢将剩余链酶亲和素溶液冲洗完全；将生物素标记AFP和AFP-L3抗体分别滴涂在链酶亲和素修饰的薄膜上，37 ^oC反应；

第六步：BSA封闭：用洗液慢慢将剩余抗体溶液冲洗完全，BSA溶液滴在经AFP和AFP-L3抗体修饰的薄膜表面，封闭裸露的壳聚糖薄膜，37 ^oC反应；

第七步：AFP和AFP-L3抗原修饰：用洗液慢慢将剩余BSA溶液冲洗完全，将AFP和AFP-L3抗原的溶液分别滴涂在各自特异性识别的ITO电极表面，37 ^oC反应；

第八步：辣根过氧化物酶修饰的抗体交联：用洗液慢慢将剩余抗原溶液冲洗完全，辣根过氧化物酶修饰的AFP和AFP-L3抗体滴涂到第七步处理好的ITO导电玻璃表面，37 ^oC反应，用洗液慢慢冲洗完全，将得到的两片ITO导电玻璃背靠背放置，工作面向外得到工作电极。

3.如权利要求2所述的一次性纳米电致化学发光双组份免疫传感器，其特征在于，所述的壳聚糖溶液的质量百分比浓度为0.025%，戊二醛溶液的质量百分比浓度为0.1%，链霉亲和素的浓度为1 mg mL^-1，BSA溶液的质量百分比浓度为5%。

4.权利要求1~3任一所述的一次性纳米电致化学发光双组份免疫传感器的制备方法，其特征在于，通过夹心免疫法制备ITO工作电极，具体方法为：

第一步：制备DMSA-CdTe QDs和GSH-CdTe QDs：通过CdCl₂作为前驱体提供Cd源，NaBH₄与Te粉反应得到的NaHTe作为前驱体提供Te源；离心浓缩纯化；GSH-CdTe QDs与锐钛矿型TiO₂纳米粒子（NPs）超声获得TiO₂-GSH-CdTe QDs复合物；

第二步：制备发光体薄膜：将DMSA-CdTe QDs溶液和TiO₂-GSH-CdTe QDs复合物悬浊液分别滴涂在两片ITO电极表面，室温晾干，获得均匀发光体薄膜；

第三步：制备壳聚糖薄膜：在发光体薄膜上分别覆盖壳聚糖溶液，室温晾干；而后使用戊二醛溶液室温活化壳聚糖薄膜；

第四步：链霉亲和素修饰：用洗液慢慢将戊二醛溶液冲洗完全，链酶亲和素滴涂在壳聚糖薄膜表面，室温下反应，而后4 ^oC下过夜；

第五步：AFP和AFP-L3抗体修饰：用洗液慢慢将剩余链酶亲和素溶液冲洗完全；将生物素标记AFP和AFP-L3抗体分别滴涂在链酶亲和素修饰的薄膜上，37 ^oC反应；

第六步：BSA封闭：用洗液慢慢将剩余抗体溶液冲洗完全，BSA溶液滴在经AFP和AFP-L3抗体修饰的薄膜表面，封闭裸露的壳聚糖薄膜，37 ^oC反应；

第七步：AFP和AFP-L3抗原修饰：用洗液慢慢将剩余BSA溶液冲洗完全，将AFP和AFP-L3抗原的溶液分别滴涂在各自特异性识别的ITO电极表面，37 ^oC反应；

第八步：辣根过氧化物酶修饰的抗体交联：用洗液慢慢将剩余抗原溶液冲洗完全，辣根过氧化物酶修饰的AFP和AFP-L3抗体滴涂到第七步处理好的ITO导电玻璃表面，37 ^oC反应，用洗液慢慢冲洗完全，将得到的两片ITO导电玻璃背靠背放置，工作面向外得到工作电极。