[发明专利]大菱鲆生长相关位点Sma‑USC114及检测引物

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体地涉及大菱鲆生长相关位点Sma-USC114及检测引物。

背景技术

近年来随着生物技术的发展，国内外学者利用分子遗传学原理和基因工程、分子标记辅助育种技术，对养殖鱼类与生长相关的功能基因进行筛选和克隆，取得了一系列成果，为进一步选育快速生长的鱼类新品种奠定了基础。其中，微卫星分子标记，因其具有多态性丰富、方法简便、快速、稳定性好等特点(徐莉等，2002)，已经被广泛应用于鱼类性状的筛选工作中。王美玉等(2012)检测半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)半同胞家系，筛选出12个与全长、体高、体重显著或极显著相关的微卫星位点；叶华等(2014)利用51个大黄鱼微卫星标记，以一个F₁家系为实验材料，发现了9个与体长、体高、体质量显著或极显著相关的微卫星位点；贾志武等(2012)分析鲫微卫星标记与几个生长性状的相关性，获得了4个标记及基因型。以上所得的微卫星标记在分子辅助育种方面起到了重要的指导作用。本实验室许可等(2009)采用分群分离分析法，以同一批受精卵孵化的同池养殖大菱鲆生长性状发生分离的群体为材料,进行微卫星遗传分析,发现位点Smc09在226bp的等位基因片段与生长性状的正相关性显著，相关系数达到0.354。本实验室应用此引物进行了长期的大菱鲆快速生长品系的选育工作，取得良好效果。然而，由于不断近交，家系后代中具有此片段的大菱鲆个体越来越多，继续应用此引物评估新建家系的生长性能变得相对困难。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供大菱鲆生长相关位点Sma-USC114及检测引物，所述位点与大菱鲆生长性能具有极其显著的相关性，并用得到的引物检测与指导大菱鲆生长性状选育，从而为快速生长大菱鲆的选育工作提供科学的辅助工具。

本发明是按如下技术方案实现的：

大菱鲆生长相关位点Sma-USC114，其与快速生长极显著正相关的155bp处扩增片段A的序列为

TAAGGTTGTGAGTGTTTGGTGGCAGGGGCTCTTCTTCTGACTCTATCTGTCTATCTGTCTATCTATCTATCTATCTATCTATCTATCCTTCCTTCCTTCCTTGCATCCATCCAATAGATTATTCTACCTCCTTTTACTCGACACCAACAGGGGATAGA。

大菱鲆生长相关位点Sma-USC114的检测引物，其序列为

R:TCTATCCCCTGTTGGTGTC，F:AAGGTTGTGAGTGTTTGGTG。

本发明还提供一种大菱鲆快速生长个体的快速检测方法，包括提取大菱鲆基因组DNA，利用所述引物进行PCR扩增，退火温度55℃。

本发明还提供一种上述位点在大菱鲆生长性状选育中的应用，利用上述引物对大菱鲆DNA进行扩增，扩增片断为154-174bp，共出现3个扩增片段，根据片段由小到大，依次命名为A、B、C，其中，具有155bp处扩增片段A的个体为快速生长个体，具有170bp处扩增片段C的个体为慢速生长个体。

本发明与现有技术相比的有益效果：

本发明的微卫星位点Sma-USC114与大菱鲆生长性能具有极其显著的相关性，用来检测大菱鲆生长性能，从而为大菱鲆快速生长选育工作提供科学的辅助工具。该发明所得标记与之前报道的分子标记具有以下优点：(1)该标记多态性并不十分丰富，仅仅具有三个扩增片段，检测时方便快捷。(2)该标记同时有两个扩增片段与生长性状极显著相关，155bp处扩增片段A与快速生长性状成极显著正相关性，170bp处扩增片段C与快速生长性状成极显著负相关性。(3)经过严格的二次验证，且二次验证采用的大菱鲆为相距较远的日照普通养殖群体，具有较强的说服力。(4)对155bp处扩增片段A进行切胶回收，克隆测序，将测序结果通过NCBI数据库BLAST比对，证实该片段序列和大菱鲆发布的基因组一段高度吻合，同源性达到97％，基因登陆号为DQ810914.1，使得该标记更具有研究意义，并且在快速生长个体鉴定中更具科学性；鱼类的生长性状作为数量性状，可量可测，验证方便，对实际生产的增产增收具有重要意义。因此研究与快速生长性状相关的标记具有重要价值。

附图说明

下面通过实施例结合附图详细叙述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。