[发明专利]一种快速检测鲜乳中沙门氏菌的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种快速检测鲜乳中沙门氏菌的方法。

背景技术

食品安全关系国计民生，食源性疾病和食品污染仍然是危害公众健康的重要因素，是当今世界最为关注的公共安全问题，据统计在世界各国的细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。对2001-2010年中国食源性疾病暴发情况进行统计分析表明，微生物污染引发的食源性疾病占总体的56.39%，沙门氏菌引发的食源性疾病占总体的10%。沙门氏菌属(Salmonella）是一群抗原构造、生化性状相似的革兰氏阴性杆菌，由沙门氏菌引起的中毒主要以急性肠胃炎为主，潜伏期一般为4～48小时，主要症状有呕吐、腹泻、腹疼、惊厥、抽搐和昏迷。

鲜乳是人们喜欢的食用营养品，营养丰富，是人体钙的最佳来源，但鲜乳极容易受沙门氏菌污染而变质，污染来源于乳畜本身及生产加工的各个环节，从而影响消费者饮食安全和健康。

目前鲜乳中沙门氏菌的检测方法，还主要依赖于传统的微生物学检测方法。传统的沙门氏菌检测法需要经过前增菌、增菌、分离培养、生化试验确认等试验步骤，至少4-7天才能得出明确的诊断结果，操作步骤繁琐、费时，而且只能检测25g/ml样品中存活的沙门氏菌，检出率较实际样品中的沙门氏菌低，极易出现假阴性结果，危害广大消费者安全。

发明内容

本发明的目的在于针对鲜乳中的沙门氏菌提供了一种快速检测方法。

基于以上目的，本发明采取了以下技术方案：

一种快速检测鲜乳中沙门氏菌的方法，包括以下步骤：

1）将鲜乳样品加入到缓冲液中得到鲜乳混合液，所述缓冲液中含有去除蛋白质和脂肪的试剂，初步去除鲜乳样品中的蛋白质和脂肪；

2）对鲜乳混合液进行滤纸过滤，再次去除鲜乳混合液中的蛋白质和脂肪，增加流动性，均匀分散滤液，取滤液进行微孔滤膜抽滤，分离微生物；

3）将步骤2）中过滤后的微孔滤膜剪碎，添加四硫磺酸钠煌绿增菌液和磷酸盐缓冲液进行冲洗浸泡，得到菌悬液；

4）向菌悬液中添加沙门氏菌免疫磁珠进行混合，振荡、静置磁力架上分层，弃上清；

5）取下层溶液，加入磷酸盐缓冲液洗涤，静置磁力架上分层，弃上清，得到浓缩待测液；

6）采用Elisa检测法进行检测即可。

步骤2）中对鲜乳混合液进行滤纸过滤后，取滤液进行离心，收集下清液，微孔滤膜抽滤。

步骤1）中所述试剂为纤维素树脂。

步骤1）中所述缓冲液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS缓冲液）。

所述微孔滤膜孔径为0.22μm。

步骤3）中所述冲洗浸泡时间≤2min，所述四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB增菌液）和磷酸盐缓冲液体积比为1：1。

步骤4）中振荡温度为37℃，振速为40rpm，振荡时间为30min，使菌悬液中的沙门氏菌与沙门氏菌免疫磁珠结合。

步骤4）中所述静置时间为3min。

步骤5）中加入的磷酸盐缓冲液与菌悬液体积比为1：1。

本发明有益效果：

1、本发明采用含有纤维素树脂的PBS缓冲液处理鲜乳样品，能够温和去除鲜乳中的蛋白质和脂肪同时，有效保护沙门氏菌；

2、采用滤纸初过滤和微孔滤膜抽滤相结合，去除鲜乳样品中的脂肪和蛋白质后，将鲜乳样品中的沙门氏菌等细菌富集到微孔滤膜上，增大了沙门氏菌的检出率，解决了低水平的病原微生物的检测问题；

3、采用TTB增菌液和PBS缓冲液作为洗脱缓冲液，TTB增菌液可有效的选择性保护沙门氏菌，有利于沙门氏菌被洗脱后在少量溶液的环境中保存和生长；

4、鲜乳样品前处理后，采用免疫磁珠富集分离方法和Elisa检测法相结合，检测鲜乳中沙门氏菌的时间总共约为50min，而国标方法所需检测时间4-7，与国标方法相比，本发明检测时间大大缩短。

具体实施方式

实施例1筛选试验

1.1鲜乳样品缓冲液的选择

取25mL鲜乳沙门氏菌阳性样品4份，分别加入装有225mL缓冲液的均质袋中，均质袋中缓冲液分别为：ddH₂O、0.01mol/L PBS缓冲液（pH7.4，下同）、碳酸盐缓冲液、缓冲蛋白胨水（BPW）。然后按照传统的沙门氏菌检测方法，对上述鲜乳混合液进行增菌、划线分离、生化试验等，试验结果如表1所示。