[发明专利]一种确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白影响的方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是大豆深加工技术，尤其是一种确确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白影响的研究方法。

背景技术

大豆蛋白,是一种高品质蛋白,具有良好营养功能，但是由于结构复杂，导致大豆蛋白的使用范围和使用量都受到限制。随着大豆蛋白的需求量不断增加和应用范围的扩大,其原有功能特性已不能满足加工要求,这就需要对大豆蛋白进行改性,以适应不同用途。植物蛋白的改性和功能性研究是当今发达国家研究的热点。通过改性等可以使大豆蛋白原有的许多功能性质，如溶解性、乳化性、持油性等均有较大程度的提高，这些功能性质的提高对大豆蛋白在食品工业中的应用具有重要价值，不同方式的改性可产生不同的功能特性,从而拓宽大豆蛋白的应用领域。

大豆蛋白经蛋白酶水解形成小分子大豆寡肽，是一种具有极强活性和多样性的小分子活性肽，它不需消化，直接吸收并直接进入细胞，发挥生理活性作用，它被人体吸收后，在人体中起载体作用，可将进入人体的其他营养物质输送到人体需要的位置。进入人体后，起信使作用，给神经传递信息。具有降血压、降血脂、调节免疫功能、抗氧化作用、低敏性、镇静安神等功效。金属离子在蛋白酶水解大豆分离蛋白的过程中起到重要作用，有些金属离子起到抑制作用，降低大豆寡肽得率，有些金属离子起到促进作用，提升大豆寡肽得率

国内外学者对金属离子的影响研究是通过测定产物的性质来确定,试验方法较复杂，随意性较大，不能准确定量确定金属离子的影响效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白影响的方法，本方法通过对蛋白酶水解大豆分离蛋白的热动力学过程进行研究,确定确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白的影响，具有灵敏度高，操作简单、实验结果精准等优点。

本发明的技术方案是：一种确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白影响的方法，包括以下步骤：（1）配制溶液：

溶液：称取大豆蛋白样品，用不同pH值的磷酸盐缓冲溶液配制浓度为10g·L^-1的大豆蛋白溶液；溶液：配制浓度为0.5g·L^-1菠萝蛋白酶溶液；溶液：配制含不同浓度Ca²⁺,Mg²⁺,Li⁺,Na⁺金属离子的，pH=6.99的大豆蛋白溶液。

大豆蛋白进行水浴处理10min；

(3)测定热功率时间曲线:取溶液或2ml放入不锈钢安瓿中，把滴定微量量热仪的连杆上绕细塑料管，塑料管中盛溶液0.5ml，先预热，当温度恒定后，将搅拌条件下，转速为120rpm，用蠕动泵把蛋白酶溶液注入安瓿中，然后进行热功率—时间曲线的测定；

本发明利用微量量热仪测出竞争性竞争时不同金属离子影响蛋白酶水解解大豆分离蛋白的热功率—时间曲线，分别计算出酶解反应的米凯利斯常数和最大反应速率

本发明的有益效果是：本发明通过对蛋白酶水解大豆分离蛋白的热动力学过程进行研究,确定确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白的影响，具有灵敏度高，操作简单、实验结果精准等优点,可以很好地对大豆深加工企业大豆肽生产中的蛋白酶水解工艺控制提供理论指导。

附图说明

图1是菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白催化反应的热动力学研究图。

图2是在T=314.63K,pH=6.99时酶催化反应的米凯利斯常数（K_m=50.31g·L^-1)和最大速率（V_max=0.2428g·L^-1·s^-1）图。

图3是在T=314.63K，pH=6.99时测定了菠萝蛋白酶对大豆蛋白催化作用在有不同离子存在和无金属离子存在时的热功率—时间曲线图。

图4是不同浓度的不同金属离子（Li⁺、Na⁺）的K¹_m和V_max，。

图5是不同浓度的不同金属离子（Ca²⁺、Mg²⁺）的K¹_m和V_max。

具体实施方式: