[发明专利]利用制浆黑液半纤维素制备木聚糖酶的方法

权利要求书

1.一种利用制浆黑液半纤维素制备木聚糖酶的方法，其特征在于，利用灰浅红链霉菌（Streptomyces griseorubens ）作为菌种，以制浆黑液半纤维素作为发酵产酶碳源；所述的灰浅红链霉菌是从微生物保藏中心或市场购买，经过驯化培养，使其适应制浆黑液半纤维素，诱导灰浅红链霉菌产木聚糖酶，定向制备无纤维素酶的木聚糖酶；制备过程包括如下步骤：

（1）灰浅红链霉菌种保藏：将灰浅红链霉（Streptomyces griseorubens ）菌株接种在斜面培养基上，在28～30℃恒温箱中培养7天后，置于冰箱内4℃以下保藏；

（2）菌株的选育：将保藏的菌种涂布于固体平板培养基上，在pH8.0、37℃的条件下培养3-7天，根据透明圈的大小挑选菌株，挑取透明圈大且明显的菌落转接到斜面培养基，再进行驯化培养；

（3）灰浅红链霉接种培养：取出保藏的菌种，解冻后量取100μL菌液在无菌条件下接种于250mL三角培养瓶中，三角培养瓶内装有50mL种子培养基，然后在摇床转速为160r/min，pH 8.0，温度为37℃的条件下培养24小时，得灰浅红链霉菌种备用；命名该菌种为灰浅红链霉菌LH-3；

（4）接种发酵培养：将种子培养基菌种的菌液接种于液体发酵培养基中进行摇瓶培养，20%装液量，14%接种量，培养条件为：温度为33～35℃，pH9.0，摇床转速为160r/min，培养4天；

（5）酶液制备：将发酵培养液经离心，取上清液，用滤纸过滤上清液，即得粗酶液。

2.根据权利要求1所述的利用制浆黑液半纤维素制备木聚糖酶的方法，其特征在于：所述的制浆黑液半纤维素的制备方法为取一定量的甘蔗渣制浆黑液，用99％乙酸调pH至8.0，加入适量的废糖蜜酒精至出现大量沉淀，放入冰箱中冷却5h，离心，用纯水洗涤沉淀两次，再离心后除去上清液，即得制浆黑液半纤维素。

3.根据权利要求1所述的利用制浆黑液半纤维素制备木聚糖酶的方法，其特征在于：所述的斜面培养基的重量百分含量为牛肉膏0.5%、蛋白胨1%、NaCl0.5%、琼脂2%，其余为水。

4.根据权利要求1所述的利用制浆黑液半纤维素制备木聚糖酶的方法，其特征在于：所述的种子培养基的重量百分含量为制浆黑液半纤维素1.0%、酵母膏1.0%、NaCl 0.4%、MgSO₄ 0.05%、K₂HPO₄ 0.05%，其余为水。

5.根据权利要求1所述的利用制浆黑液半纤维素制备木聚糖酶的方法，其特征在于：所述的固体平板培养基的重量百分为含量制浆黑液半纤维素3.0%、酵母膏0.3%、MgSO₄·7H₂O 0.05%、NaCl 0.05%、K₂HPO₄ 0.05%，琼脂2%，其余为水。

6.根据权利要求1所述的利用制浆黑液半纤维素制备木聚糖酶的方法，其特征在于：所述的液体发酵培养基的重量百分含量为制浆黑液半纤维素3.0%、酵母膏0.3%、K₂HPO₄ 0.06%、FeSO₄·7H₂O 0.001%、MgSO₄·7H₂O 0.05%、NaCl 0.05%，其余为水。

7.根据权利要求1所述的利用制浆黑液半纤维素制备木聚糖酶的方法，其特征在于：制备过程第（3）步中，灰浅红链霉接种培养，如果灰浅红链霉在制浆黑液中生长旺盛，则可以进行发酵培养，否则还要精选灰浅红链霉菌重新给其适应种子培养基培养。