[发明专利]一种海参生物碱及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种海参生物碱及其制备方法和应用。

背景技术

海洋中蕴藏着极为丰富的资源和能源，而我国海区拥有的物种也十分多样，随着海洋产业不断的快速发展，越来越多的企业家都把目光投向了海洋这块市场，因此近十几年来我国海洋制药行业发展得十分迅猛，而国内对棘皮动物门中海参的研究也是一大热门的领域。

海参为棘皮动物门(Echinodenmata)海参纲(Holothunoider)生物，全世界的海参有1200多种，我国海域约有140多种。根据触手的形状、管足和呼吸树的有无可将其分为6目：枝手目(Dendrochirotida)、指手目(Dactylochirotida)、无足目(Apodida)、芋参目(Molpadiida)、平足目(Elasipodida)和楯手目(Aspidochirotida)。海参含有海参皂苷、胶原蛋白、海参多糖、脑苷酯、神经节苷酯、甾醇等多种生物活性成分，这些活性成分具有抗肿瘤、抗凝血、抗病毒及增加免疫力等作用。

而有关生物碱，1983年派勒蒂埃(Pelletier)^[107]对生物碱给出了比较合理的定义，其认为生物碱(alkaloids)是含有负氧化态氮原子的存在于生物有机体内的环状化合物。广义上说，生物界中所有含氮的有机化合物都可称为生物碱。生物碱是海洋生物的第二大类次生代谢产物，海洋生物碱的主要来源包括藻类、被囊动物、海绵动物和腔肠动物等海洋生物以及微生物，大多具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎等活性。1983年，Kirkap等首次从红藻Martensia fragilis中分离出吲哚类生物碱fragilamide，在这之后，越来越多的研究者从海洋生物中发现了生物碱，得到了更多的特殊的化学结构和生理活性。由氨基酸衍化而来的生物碱是海洋来源生物碱的主要组成部分。作为生物碱前体的氨基酸有芳香族氨基酸(酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸)和鸟氨酸、赖氨酸、邻氨基苯甲酸等。

海参生物碱方面，目前的研究仍较少。刘平等在2013年9月4日公开的CN103271934A发明专利申请公开了“一种含有生物碱类活性成分的海参提取物及其提取方法和应用”，其从海参提取物中分离出5个生物碱类活性成分H2a、H2b、H2c、H2d、H2e，实验证明该发明的海参提取物及所含的生物碱类化合物具有治疗贫血、免疫功能低下、创伤及疲劳修复、放化疗后的免疫修复等潜在用途。而有关海参生物碱类化合物的抗肿瘤活性未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种海参生物碱。

本发明的另一目的在于提供上述海参生物碱的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述海参生物碱的应用。

本发明的具体技术方案如下：

一种海参生物碱，为6-OH刺桐碱，其分子式为C₁₄H₁₈N₂O₃，其结构式如下：

一种上述海参生物碱的制备方法，包括如下步骤：

(1)将新鲜海参去除内脏后，放入沸水中煮20～40min，捞出海参，得海参水煮液；

(2)将海参水煮液调pH为10～11，离心取上清，将上清液上样于大孔吸附树脂柱，吸附饱和后，分别用去离子水和17～23％乙醇溶液洗柱；

(3)用70～75％乙醇溶液冲洗上述大孔树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩至浸膏状，得海参浸膏；

(4)将海参浸膏用去离子水复溶后，离心取上清，上清液经石油醚萃取取水层，再用水饱和正丁醇萃取，合并正丁醇层，再减压浓缩至浸膏状，冷冻干燥即得海参提取物；

(5)将海参提取物经中高压制备液相色谱仪，用乙腈-水洗脱体系进行洗脱，203nm处紫外检测，对15.34min的峰进行收集，冷冻干燥即得所述海参生物碱，乙腈-水洗脱体系为：0～3min采用10％乙腈洗脱，3～33min用10％～100％的乙腈进行梯度洗脱，33～43min用100％乙腈洗脱。

在本发明的一个优选实施方案中，所述海参为刺参。

在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(1)为：将新鲜海参去除内脏后，放入沸水中煮20～30min，捞出海参，得海参水煮液。

在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(2)为：将海参水煮液调pH为10，离心取上清，将上清液上样于大孔吸附树脂柱，吸附饱和后，分别用去离子水和20％乙醇溶液洗柱。

进一步优选的，所述大孔吸附树脂柱的型号为AB-8。