[发明专利]一种检测茶叶中咖啡碱的方法

说明书

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种检测茶叶中咖啡碱的方法。

背景技术

茶叶咖啡碱属于生物碱，是茶叶嘌呤碱的一种，味苦，具有药用价值和保健价值，一般在茶叶里占干物质含量的2.0％～5.0％，多的达6.0％以上，是组成茶叶滋味的主要化学成分之一，测定其含量多少对衡量茶叶品质优次有重要作用。茶叶中咖啡碱有多种检测方法，包括碘量法、重量法、紫外分光光度法、定氮法、比色法、气相法、高效液相色谱法、层析法以及近红外光谱法等，目前较为常用的有两种：高效液相色谱法、紫外分光光度法。

高效液相色谱法，要求实验条件相对较高，紫外分光光度法因其具有简便、快速的特点而为大多数检测单位所采用。紫外分光光度法是利用咖啡碱溶液在紫外光区波长274nm处有一个最大的吸收峰，用碱式乙酸铅作为沉淀剂，除去茶多酚、蛋白质及色素等物质，然后直接用274nm波长的紫外光，测定提取液光密度数值，计算咖啡碱含量。GB/T8312-2002茶叶咖啡碱检验中记载了采用紫外分光光度法计算咖啡碱含量的方法，其中试液的制备：称取3g(准确至0.001g)磨碎试样于500mL锥形瓶中，加沸蒸馏水450mL，立即移入沸水浴中浸提45min(每隔10min摇动一次)。浸提完毕后立即趁热减压过滤，滤液移入500mL容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤2～3次，并将滤液滤入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度。现有的紫外分光光度法测定茶叶咖啡碱时制作的标准曲线线性范围较窄，标准溶液浓度设定、以试剂空白作参比等不太科学。线性范围窄，当茶叶样品的咖啡碱含量较大时，所测得的吸光度对应浓度常超出线性范围，误差较大。以现有线性范围来检测，茶叶咖啡碱含量最大值约4.0％，而实际上很大部分茶叶咖啡碱含量在4.0％以上，标准溶液浓度范围设定不科学，按传统方法检测结果重复性不好。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测茶叶中咖啡碱的方法，该方法能检测的含量范围广，重复性好，检测结果更接近真实值。

本发明所采取的技术方案是一种茶叶咖啡碱含量检测方法，包括以下步骤：

a、试液制备：称取3g(准确至0.001g)磨碎试样于500mL锥形瓶中，加沸蒸馏水450mL，立即移入沸水浴中，浸提45min(每隔10min摇动一次)，浸提完毕后立即趁热减压过滤，滤液移入500mL容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤2～3次，并将滤液滤入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度，试样测定的同时作试剂空白；

b、用移液管准确吸取试液10mL移入100mL容量瓶中，加入4mL0.01mol/L盐酸和1mL碱式乙酸铅溶液，用水稀释至刻度，混匀，静置澄清过滤，得滤液，准确吸取该滤液25mL，注入50mL容量瓶中，加入0.1mL 4.5mol/L硫酸溶液，加水稀释至刻度，混匀，静置澄清过滤。用10mm比色杯，在波长274nm处，以标准曲线0管作参比，测定吸光度(A)；

c、咖啡碱标准曲线的制作

咖啡碱标准溶液：称取100mg咖啡碱(纯度不低于99％)溶于100mL水中作为母液。准确吸取5mL母液于100mL容量瓶，加水至刻度摇匀作为咖啡碱工作液(1mL工作液含咖啡碱50ug)。

分别吸取0、0.5、1、3、5、7、10mL咖啡碱工作液于一组25mL容量瓶中，各加入1.0mL盐酸，用水稀释至刻度，混匀，用10mm石英比色杯，在波长274nm处，以标准曲线0管作参比，测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的咖啡碱浓度绘制标准曲线；

d、结果计算

茶叶中咖啡碱含量以干态质量分数表示，按下式计算

式中：

C₂——试样测得的吸光度(A)从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱相应含量，减去试剂空白测得的吸光度从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱的含量后的值；

L₃——试液总量mL；

M₂——试样用量g；

m₂——试样干物率％。