[发明专利]一种SD大鼠多发性抽动症动物模型的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物模型的构建方法，具体地说涉及一种IDPN注射诱导SD大鼠多发性抽动症动物模型的构建方法。

背景技术

多发性抽动症(Tourette Syndrome，简写为TS)又称抽动-秽语综合征。其临床特征为慢性、波动性、多发性运动肌快速抽搐，并伴有不自主发声和语言障碍。该病以肢体抽掣及喉中发出怪声或口出秽语为主要临床表现，起病在2～12岁之间，男孩发病率较女孩约高3倍。一般首发症状为简单运动抽动，以面部肌肉的抽动最多，呈间断性，少数患者的首发症状为简单的发声抽动。随病程进展，抽动的部位增多，逐渐累及到肩部、颈部、四肢或躯干等部位，表现形式也由简单抽动发展为复杂抽动，由单一运动抽动或发声抽动发展成两者兼有，发生频度也增加。其中约30％出现秽语症或猥亵行为。多数患者每天都有抽动发生，少数患者的抽动呈间断性，但发作间隙期不会超过2月。病程持续迁延，超过一年以上，给患者及患者家庭带来了沉重的经济和心理负担，严重影响了他们的生活质量。

但是由于TS的发病机理尚有许多不明之处，特别是现阶段还没有完全模拟人类TS的动物模型，深入了解TS病理机制存在着很大阻碍，导致目前还没有特效的治疗方法，所以构建出模拟人类TS的理想动物模型，并在此基础上阐明TS的发病机制与病因，最终找到有效的治疗方法是当务之急。

就现阶段研究结果来看，TS发病与脑内单胺类递质，尤其是多巴胺(DA)系统递质含量变化密切相关，可以由TS模型鼠单胺类递质失衡，尤其是由DA递质失衡的病理特点来判断是否有TS发病迹象，现有技术中化学诱发性TS动物模型主要有(1)苯丙胺(AMP)模型，造模后因造模剂量不同，小鼠嗅探、咬等行为表现出程度差异；(2)阿扑吗啡(APO)模型，造模后小鼠活动性增高，出现短暂攀爬行为；(3)亚氨基二丙腈(IDPN)模型，造模后模型鼠中枢神经兴奋性增加，空间认知能力受损；上述模型中，AMP、APO表面效度短暂，在中医药防治TS中使用受限，而IDPN表面效度明显、稳定、持久且建模时间短，主要表现为ECC综合症，但是现有IDPN模型基本给药量大，对模型鼠造成的毒性大，不符合国际动物模型的伦理性要求；不利于对模型鼠的后续病理分析。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于现有IDPN诱发TS模型给药量大，对模型鼠造成的毒性大，不符合国际动物模型的伦理性要求；且对老鼠造成了不可逆性的伤害，使得后期的给药效果受到干预，模型鼠症状表现不佳；此外小鼠脑组织体积小，取样分析有限。从而提出一种既能满足给药量小又能使得模型症状明显的大鼠多发性抽动症动物模型的构建方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

本发明提供了一种SD大鼠多发性抽动症动物模型的构建方法，包括如下步骤：

(1)选择体重为40-60g的SD大鼠72只，分为空白对照组和若干组IDPN注射组；

(2)将IDPN稀释为22.5mg/ml，按照注射量为225mg·kg^-1·d^-1采用腹腔注射的方法向一组IDPN注射组的大鼠注射所述IDPN，向所述空白对照组的大鼠注射与所述IDPN注射组同体积的0.9％的氯化钠溶液，1次每天；

(3)连续注射5-6天后，对大鼠进行行为学评测、脑纹状体单胺类递质含量和氨基酸类神经递质的变化分析。

进一步地，所述步骤(2)中，注射IDPN过程中，给药位点深度为8-10mm，给药速度为0.1-0.2ml/s。

进一步地，所述行为学评测内容包括刻板运动评测和自主活动评测。

进一步地，所述单胺类递质包括5-羟吲哚乙酸、5-羟色胺、多巴胺、3，4-二羟基苯乙酸、高香草酸和去甲肾上腺素。

进一步地，所述氨基酸类神经递质包括谷氨酸、Y-氨基丁酸、谷氨酰胺、甘氨酸和Tau蛋白。

所述空白对照组有12只SD大鼠，所述IDPN注射组共5组，每组12只大鼠。

本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：