[发明专利]一种人毛囊干细胞库的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种人类毛囊来源的成体干细胞库，即人毛囊干细胞库的构建方法。

背景技术

干细胞（stem cell, SC）是指具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的原始细胞，根据分化能力可分为胚胎干细胞（embryonic stem cells, ESCs）和成体干细胞（adult stem cells, ASCs）。胚胎干细胞即全能型干细胞，在分化能力上最具研究价值，但其来源于胚胎，势必存在着伦理方面和安全性方面（潜在致瘤性）的问题，所以胚胎干细胞在应用上受到了限制。成体干细胞虽在分化能力上弱于胚胎干细胞，但其避开了伦理方面和安全性方面的问题，且自体成体干细胞移植，还可解决免疫排斥问题，避免了长期应用免疫抑制剂所造成的伤害，所以从临床应用上成体干细胞优于胚胎干细胞。

成体干细胞主要存在于能自我更新的组织和器官中，皮肤组织更新和再生能力强，而毛囊作为其附属器官，终身保持着周期性生长和自我更新的能力。研究表明，毛囊是目前为止存在于胚胎组织之外唯一类胚胎组织，兼有胚胎干细胞和成体干细胞的优点。毛囊中存在着大量多潜能干细胞，可经体外诱导分化为平滑肌细胞、神经元细胞、神经胶质细胞和黑色素细胞等。所以毛囊干细胞(hair follicle stem cells, HFSC)的研究越来越受到人们的关注。

毛囊是皮肤的一种附属成分, 是由表皮下陷形成的, 由上皮性毛根鞘及结缔组织鞘所构成, 位于毛发的下段并且包围着毛根。毛囊上附有立毛肌, 并与皮脂腺相连, 同时汗腺也开口于毛囊。上皮性毛根鞘的细胞起源于表皮, 结缔组织鞘起源于真皮。上皮性毛根鞘是由皮肤的表皮层下凹深入真皮、皮下脂肪层而成, 作为表皮的延续部分而包绕毛发, 由内向外依次分为鞘小皮、内根鞘和外根鞘, 外根鞘相当于表皮的基底层和棘细胞层。在毛干上部外毛根鞘细胞增殖, 并且形成隆起, 成为毛发上段的标记。Cotsarelis等(1990) 认为该隆突部位可环绕整个毛干上部或仅限于单侧即立毛肌附着处, 目前被认为是毛囊干细胞存在的主要部位。

Bickenbach等(1981) 在皮肤表皮基底层中发现了标记滞留细胞(label retaining cell, LRC) , 即后来的表皮干细胞。此后, Cotsarelis等(1990) 、Taylor等(2000) 研究结果发现, 在位于表皮之下的毛囊侧部的隆突处也有干细胞的存在, 它们具有更大的增殖潜能和克隆形成能力, 这些干细胞不仅能够向下转移到毛囊根部生成毛囊, 而且还能从毛囊外根鞘向上迁移，生成表皮和皮脂腺。他们把这一细胞定义为毛囊干细胞，认为这一多能干细胞可能是表皮细胞的祖细胞, 对各种皮肤疾病的细胞代替治疗和基因治疗方面的研究有重要意义。

为了将获得的人类不同来源的干细胞应用于未来的研究及细胞治疗，目前在世界不同国家及地区内，人类已经建立了多个干细胞库，例如脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脐血干细胞等。所谓的干细胞库即将干细胞在特殊的冻存保护液中储存于-196℃的液氮以及集中存放干细胞资源相关资料的场所。一个完善的干细胞库应具备长期保存干细胞，维持其干细胞的基本特性，并且能够随时随地将储存的健康干细胞提供临床使用的能力。到目前为止，已经成熟的其他成体干细胞都已发展为库，而由于人毛囊干细胞发现较晚，所以尚无相关的人毛囊干细胞库，因此，成功构建人毛囊干细胞库，将健康的人毛囊干细胞通过本发明建立的系统工程技术储存建库，是将现有的资源充分利用的有效方法，为储存本人、家属和他人在需要采用人毛囊干细胞移植及相关技术治疗各种疾病时，提供临床适用型人毛囊干细胞，具有十分广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人毛囊干细胞库的构建方法，上述方法具有原料来源广泛、获取便捷、成本低、应用前景广阔，可为临床和研究提供大量干细胞资源的优点。

本发明提供的一种人毛囊干细胞库的构建方法，包括以下步骤：

1) 供者毛发的采集：采集供者毛发之前，进行采集至少包括供者身份识别信息的信息；然后对供者进行包括ABO/Rh血型检测、HLA分型的检测以及HIV、HBV、HCV的检测，然后在无菌条件下采集供者的毛发；