[发明专利]一种检测皮层神经元轴突生长导向的方法及其应用

权利要求书

1.一种检测皮层神经元轴突生长导向的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a.制备表面带有微通道的PDMS印章

将PDMS的预聚体与偶联剂搅拌混合，抽真空除气后倒入浇注模具，加热至80℃并保温1h固化，脱模得到PDMS印章；所述的PDMS印章下表面带有间隔相等的平行微通道；

b.条带包被

取消毒的玻片放入培养皿中，加入多聚赖氨酸进行包被，将制备好的PDMS印章扣在多聚赖氨酸包被的玻片上，将需要研究的导向因子用FITC-BSA稀释到作用浓度，然后加入到印章的微通道一端，于通道另一端抽吸使溶液充满整个通道，待溶液干后，移除印章，在玻片上形成含有导向因子的平行条带；

c.神经元种植

将步骤b中制得的玻片置于冰上，玻片上加入BD Matrigel，在Matrigel上进行神经元培养；

d.染色与分析

使用免疫荧光技术进行染色，观察新生的轴突是否进入含有导向因子的条带，计算新生的轴突中进入含有导向因子的条带的比例，并进行统计分析该种导向因子对轴突具有吸引还是排斥的作用。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PDMS印章下表面的通道宽为60μm、高为100μm，每个平行的通道之间间隔为90μm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤b中多聚赖氨酸浓度为0.1mg/ml。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤c中Matrigel胶加入量为50μl/cm²。

5.权利要求1-4任一所述的方法在检测皮层植块神经元轴突生长导向、检测导向因子对皮层植块神经元轴突是吸引还是排斥作用中的应用。