[发明专利]一种星油藤的组织培养快繁方法

说明书

技术领域

    本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种星油藤的组织培养快繁方法。

背景技术

星油藤（Plukenetia volubilis L.）又名南美油藤、印加果、印加花生等，是大戟科一种多年生木质藤本油料植物，原产于南美洲安第斯山脉地区热带雨林。从星油藤种子中榨取的植物油，由于其富含多元不饱和脂肪酸且以Omega脂肪酸为主，ω-3,ω-6,ω-9三种不饱和脂肪酸高达92%以上，因此被认为是世界上最好的植物油，可用于食品、保健、制药、化妆品等方面，对调整血脂、预防心血管疾病、保养肌肤等也有显著的作用。星油藤被引进中国科学院西双版纳热带植物园，由于应用前景广泛，云南、贵州等省市大力发展星油藤产业。但是，星油藤为新引进作物，资源较少,价格昂贵，不利于其大面积推广种植。

    目前，星油藤种苗主要通过种子和扦插方式繁育，种子播种虽然可在短时间内获得大量幼苗，但因星油藤为雌雄同株异花授粉植物，后代易发生性状分离，遗传性状不稳定，易丢失亲本的优良性状。而扦插方式繁育需要大量的枝条，且从扦插到移栽大田需2个月，耗时较长。因此，釆用植物组织培养技术来缓解其种苗紧张压力、进行可持续开发利用是十分必要的。因此，本发明以星油藤带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了星油藤离体再植株，建立星油藤组织培养快速繁殖技术体系，对于进行星油藤优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进星油藤的产业化发展具有重要意义。

发明内容

    本发明的目的在于提供一种星油藤的组织培养快繁方法，通过诱导不定芽、丛生芽增殖、试管苗生根、炼苗移栽等阶段成功获得了星油藤离体再植株，建立星油藤组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种星油藤的组织培养快繁方法，包括以下的工艺步骤：

（1）诱导不定芽：选取星油藤当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒5～20秒种后，用无菌水冲洗2～5次后置于0.1%的升汞溶液中消毒10～30分钟，然后用无菌水冲洗3～6次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成2～4cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽。

（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照12～15小时，光照强度为1500～2000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，20～30天转接一次。

（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至2～4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～5天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。

（4）炼苗移栽：将长至6～8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙（8：1：1）混合成的基质中并定植于大田中。

上述步骤（1）所述的诱导培养基为：MS+0.1～0.5mg/LTDZ+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/LNAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8;

上述步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/LNAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；

    上述步骤（3）所述的生根培养基为：1/2MS+0.1～0.5mg/LIBA+1.0～2.0mg/L GGR（注：双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研究开发中心）+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。