[发明专利]一种高效生产维生素C-2磷酸酯的方法

权利要求书

1.一种高效生产维生素C-2磷酸酯的方法，其特征在于，所述方法是以重组菌株E.coli BL21(DE3)/pET20b^--asp破碎后的菌体悬液作为酶制剂，在转化温度为30-50℃、转化pH为3.8-5.5的条件下，与150-250g/L的维生素、0.2-1.0mol/L的焦磷酸钠反应，转化时间为0.5-4h；所述重组菌株菌体，按干重计，添加量为2.6-20g/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组菌株是先进行诱导产酶培养，然后再破碎作为酶制剂；所述诱导产酶培养是指：将菌株培养至OD₆₀₀在0.2-1.4范围内，加入2-10g/L的乳糖进行诱导，诱导温度为30-37℃，诱导时间为2-10h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组菌以E.coli BL21(DE3)为宿主、pET20b^-为载体，重组表达来源于Sphingomonas trueperi中的维生素C磷酸化酶基因asp。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述诱导培养具体是：将菌株培养至OD₆₀₀在0.4，加入6g/L的乳糖进行诱导，诱导温度为37℃，诱导时间为4h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述E.coli BL21(DE3)/pET20b^--asp的破碎的具体条件是：功率17w，总时间30min，间歇4s，超声4s。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述在转化温度为30-50℃、转化pH为3.8-4.6的条件下，与150-225g/L的维生素C、0.5-0.9mol/L的焦磷酸钠反应，转化时间为1-2.5h；所述重组菌株菌体的添加量为2.6-13.2g/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转化温度43℃、pH 4.2、维生素C浓度200g/L、焦磷酸钠浓度0.6mol/L、菌体量10.6g/L。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具体是：(1)将E.coli BL21(DE3)/pET20b^--asp菌株培养至OD₆₀₀在0.4-0.6，加入6g/L的乳糖进行诱导，诱导温度为37℃，诱导时间为4h；(2)将上一步得到的菌体收集、破碎；(3)以上一步破碎后的菌体悬液作为酶制剂，在43℃、pH 4.2下进行反应，其中维生素C浓度200g/L、焦磷酸钠浓度0.6mol/L、菌体量10.6g/L。

9.根据权利要求1-8任一所述方法得到的维生素C-2磷酸酯。

10.权利要求9所述维生素C-2磷酸酯在食品、有机合成、化妆品和饲料方面的应用。