[发明专利]一种耐热β‑葡萄糖苷酶及其突变体在制备牛蒡子苷元中的应用有效
| 申请号： | 201510203453.9 | 申请日： | 2015-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN104818261B | 公开（公告）日： | 2017-11-17 |
| 发明（设计）人： | 薛业敏;候静静 | 申请（专利权）人： | 南京师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12P17/04 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 210046 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 耐热 葡萄 糖苷酶 及其 突变体 制备 牛蒡 子苷元 中的 应用 | ||
1.耐热β-葡萄糖苷酶突变体在牛蒡苷转化为牛蒡子苷元中的应用，其特征在于所述的耐热β-葡萄糖苷酶是指来源热袍菌属Thermotiga的糖苷水解酶家族1β-葡萄糖苷酶TbglA；耐热β-葡萄糖苷酶突变体是N223T、G224F和N223T/G224F，氨基酸序列如SEQ：ID NO.1、ID NO.2和ID NO.3所示。
2.一种制备牛蒡子苷元的方法，其特征在于，以牛蒡苷为底物，在耐热β-葡萄糖苷酶突变体的作用下通过酶解法制得牛蒡子苷元；所述的耐热β-葡萄糖苷酶是指来源热袍菌属Thermotiga的糖苷水解酶家族1β-葡萄糖苷酶TbglA；耐热β-葡萄糖苷酶突变体是N223T、G224F和N223T/G224F，氨基酸序列如SEQ：ID NO.1、ID NO.2和ID NO.3所示。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征是，向牛蒡苷底物中加入pH为4.2-7.5的磷酸钠-柠檬酸缓冲溶液，料液比为1:2-10g/mL；加入β-葡萄糖苷酶突变体，其添加量为100-1000U/g底物，混合均匀后于60-95℃下低速搅拌反应5-90min，取反应液于4-10℃和4000rpm-8000rpm下离心10-20min，取沉淀物备用，上清液用作下批提取的配料用水；向沉淀物中加入3-10倍体积且浓度为75％-100％乙醇进行边搅拌边提取，然后抽滤去渣，滤液进一步经真空浓缩得到所述牛蒡子苷元产品。
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