[发明专利]诊断人SHOX2基因和人RASSF1A基因甲基化的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测肺癌的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包括：

特异性检测人SHOX2基因的DNA甲基化的检测试剂，其是：SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:18所示的引物以及SEQ ID NO:25所示的探针；和

特异性检测人RASSF1A基因的DNA甲基化的检测试剂，其是：SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10所示的引物以及SEQ ID NO:22所示的探针。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括：特异性检测内参基因的检测试剂，其是针对人β-actin基因的引物和探针。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的引物和探针针对人β-actin基因中SEQ ID NO:5经亚硫酸氢盐或重亚硫酸氢盐或肼盐修饰后的序列。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的特异性检测内参基因的DNA甲基化的检测试剂是：SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:21所示的引物以及SEQ ID NO:26所示的探针。

5.如权利要求1-4任一所述的试剂盒，其特征在于，针对每一基因的探针连接有特定的荧光基团。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，针对人SHOX2基因的探针标记VIC荧光素，针对人RASSF1A基因的探针标记FAM荧光素，针对人β-actin基因的探针标记CY5荧光素。

7.如权利要求1-4任一所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中，针对人SHOX2基因的引物和探针的比例为：0.2：0.06；或

该试剂盒中，针对人RASSF1A基因的引物和探针的比例为：0.2：0.06；或

该试剂盒中，针对人β-actin基因的引物和探针的比例为：0.67：0.02。

8.权利要求1-4任一所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中，还包括：DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺离子或包含DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺离子的PCR体系。

9.权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的包含DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺离子的PCR体系中，所述的Mg²⁺离子浓度为3.5±0.5mM；或所述的dNTPs浓度为0.25±0.3mM；或所述的DNA聚合酶为1.5±0.2U。

10.权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括：亚硫酸氢盐或重亚硫酸氢盐或肼盐。

11.特异性检测人SHOX2基因和人RASSF1A基因的DNA甲基化的试剂的用途，用于制备检测肺癌的试剂盒；所述的特异性检测人SHOX2基因的DNA甲基化的检测试剂是：SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:18所示的引物以及SEQ ID NO:25所示的探针；

所述的特异性检测人RASSF1A基因的DNA甲基化的检测试剂是：SEQ IDNO:7和SEQ ID NO:10所示的引物以及SEQ ID NO:22所示的探针。

12.一种体外非诊断性地检测人SHOX2基因和人RASSF1A基因的DNA甲基化的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)将待测样品进行亚硫酸氢盐或重亚硫酸氢盐或肼盐处理，获得经修饰的待测样品；

(2)利用权利要求1-10任一所述的用于检测肺癌的试剂盒对步骤(1)的经修饰的待测样品进行检测，获得人SHOX2基因的DNA甲基化情况和人RASSF1A基因的DNA甲基化情况。