[发明专利]一种自抛光型酶基防污涂料的制备方法

权利要求书

1.一种自抛光型酶基防污涂料的制备方法，其特征在于制备方法包括多糖水解酶与蛋白酶产生菌的分离纯化培养、防污活性酶制剂制备和酶基防污涂料制备三个步骤：

(1)、多糖水解酶与蛋白酶产生菌的分离纯化培养包括两个方面

①、多糖水解酶产生菌的分离纯化与培养，在2OOm12216E液体培养基中加入50m1天然海水,于30℃下富集培养48h，然后将菌液在琼脂培养基上进行划线分离并于25℃下培养72h，用接种针挑取显著水解琼脂的菌落在培养基上进行进一步分离纯化，直到细胞菌落形态稳定一致，得到多糖水解酶产生菌；采用2216E液体培养基，控制培养基的盐度为3-4％、pH值为7.0-9.0，在25-35℃下培养7-15天，获得含有多糖水解酶的培养液；

②、石灰虫源蛋白酶产生菌的分离纯化与培养，将从潮间带取得的石灰虫外壳在无菌条件下碾碎，放入25Om12216E液体培养基中于30℃下富集培养48h，然后将菌液在酪蛋白琼脂培养基上进行划线分离并于25℃下培养72h，用接种针挑取显著水解酪蛋白(水解圈)的菌落在培养基上进行进一步分离纯化，直到细胞菌落形态稳定一致，得到2株蛋白酶产生菌即SHC-1和SHC-2；SCH-1采用2216E液体培养基，控制培养基的盐度为0.5-1.5％、pH值为7.0-8.0，在30-40℃下培养7-10天，获得含有蛋白酶的培养液；SCH-2采用2216E液体培养基，控制培养基的盐度为0.5-1.5％、pH值为7.0-8.5，在25-35℃下培养7-10天，获得含有蛋白酶的培养液；

(2)、防污活性酶制剂制备

将源于海水菌株的多糖水解酶和源于石灰虫外壳菌株的两种蛋白酶均采用相同的分离纯化工艺，将含有多糖水解酶的培养液和含有蛋白酶的培养液分别在冷冻离心机中于3500rpm/min条件下离心40min，取上清液并用硫酸铵饱和溶液盐析，盐析液静置48h后于8000rpm/min转速下离心40min，将离心获得的沉淀物通过水相层析纯化，并吸附于碳纳米管中，减压冷冻干燥后分别制得相应的防污活性酶制剂；

(3)、酶基防污涂料制备

选用已公开专利ZL200810014220.4一种羟基硅油改性丙烯酸树脂作为自抛光型成膜物，其结构式为：

式中X1、X2为H或CH3；R为C1-C7的烷基链；m为2-12的自然数，n为1-3的自然数；A为O元素或NH2基团；R1、R2均为C1-C7的烷基链；所述的自抛光型酶基防污涂料由各原料按重量百分比选取羟基硅油改性丙烯酸树脂55-70％，松香3.5-8％，有机膨润土1-3％，碳纳米管固定多糖水解酶10-15％，碳纳米管固定SCH-1蛋白酶5-10％，碳纳米管固定SCH-2蛋白酶10-15％和以BYK-163润湿分散剂为0.5-2％的助剂组成；该自抛光型酶基防污涂料制备时，在搅拌状态下向羟基硅油改性丙烯酸树脂溶液中加入松香、有机膨润土，搅拌均匀后再加入防污活性酶制剂和助剂，将上述物质通过高速分散机分散均匀即制得自抛光型酶基防污涂料。

2.根据权利要求1所述的自抛光型酶基防污涂料的制备方法，其特征在于所述多糖水解酶分解琼脂测试过程为用接种针蘸取多糖水解酶产生菌培养液在琼脂培养基上进行划线，于25℃下培养3天，观察琼脂培养基分解情况。

3.根据权利要求1所述的自抛光型酶基防污涂料的制备方法，其特征在于所述SCH-1蛋白酶和SCH-2蛋白酶分解酪蛋白测试过程为用接种针蘸取SCH-1蛋白酶产生菌和SCH-2蛋白酶产生菌培养液在酪蛋白培养基上进行划线，于25℃下培养3天，观察酪蛋白分解情况。

4.根据权利要求1所述的自抛光型酶基防污涂料的制备方法，其特征在于所述自抛光型酶基防污涂料抑制典型污损生物藤壶幼虫附着测试过程为将本发明实施例5-7制备的自抛光型酶基防污涂料涂刷于5cm×5cm的马口铁片上，涂刷市售的不含防污剂且不具有自抛光性能的丙烯酸树脂为对照试样，每种涂料3个平行样；涂料干燥后，将试样片置于直径9cm的培养皿中，加入30ml天然海水，每个培养皿中放入50只活泼的藤壶附着期幼虫，在黑暗处培养48h,观察酶基防污涂料抑制典型污损生物藤壶幼虫附着情况。