[发明专利]一种益生菌产品中活性鼠李糖乳杆菌快速分离与计数方法有效
申请号: | 201510204220.0 | 申请日: | 2015-04-27 |
公开(公告)号: | CN104805043B | 公开(公告)日: | 2017-07-04 |
发明(设计)人: | 杨振泉;张咪;高璐;饶胜其;尹永祺 | 申请(专利权)人: | 扬州大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;G01N33/569;C12R1/225 |
代理公司: | 南京知识律师事务所32207 | 代理人: | 卢亚丽 |
地址: | 225009 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 益生菌 产品 活性 鼠李糖乳 杆菌 快速 分离 计数 方法 | ||
1.干酪乳杆菌群菌毛亚基FimI在活性鼠李糖乳杆菌快速分离与计数中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,大肠杆菌表达系统获得干酪乳杆菌群的菌毛亚基FimI,重组FimI用镍柱纯化后免疫小鼠获得多克隆抗体;将含有鼠李糖乳杆菌样品按常规处理后进行MRS平板涂布,37℃厌氧培养36h;以硝化纤维膜为固相载体进行菌落转印,转印膜通过干燥固定、脱脂乳封闭、洗涤、加抗体孵育后用DAB显色;根据膜上出现明显斑点对样品中的活性鼠李糖乳杆菌进行计数,同时通过斑点位置实现鼠李糖乳杆菌快速分离。
3.一种益生菌产品中活性鼠李糖乳杆菌快速分离与计数方法,其步骤包括:
1)干酪乳杆菌群特异性菌毛亚基FimI为靶抗原制备多克隆抗体;作为鼠李糖乳杆菌检测抗体;
2)利用检测抗体采用菌落免疫印迹法检测和定量样品中的鼠李糖乳杆菌;
3)菌落免疫印迹结合MRS平板计数对样品中鼠李糖乳杆菌进行定量检测。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于步骤2)中,以硝酸纤维素膜为固相载体,菌落细胞作为固相抗原进行斑点免疫印迹分析。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于步骤3)中,MRS平板计数与菌落斑点免疫印迹结合,定量检测样品中的鼠李糖乳杆菌活菌数。
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