[发明专利]针对PCSK9的全人源单克隆抗体的可变区基因及其应用

说明书

本发明涉及基因工程抗体技术领域，特别涉及一种针对PCSK9的全人源单克隆抗体和全长抗体的制备方法和用途。所述可变区基因，其重链可变区编码的多肽与SEQ ID NO.1所示序列至少有80％同一性，其轻链可变区编码的多肽与SEQ ID NO.2所示序列至少有80％同一性。更具体而言，本发明利用人源单克隆抗体噬菌体展示文库筛选到针对人PCSK9的Fab抗体,并利用基因工程的方法得到完整全长抗体。本发明的抗体可以特异性的结合PCSK9，有效影响PCSK9与LDLR的相互作用，抑制LDLR的降解，可应用于治疗胆固醇及脂类代谢疾病。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种新的可与PCSK9特异结合的高亲和力全人源Fab抗体和全长抗体，能够削弱或阻断PCSK9与低密度脂蛋白受体(LDLR)之间的相互作用，抑制PCSK9介导的LDLR降解，从而协助增加低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的摄取，是一种具有降血脂活性的基因工程抗体。

背景技术

高胆固醇血症是心血管疾病的重要发病因素。大量临床研究显示降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平有助于减少心血管疾病的发病风险，改善临床结果。他汀类药物(Statins)是目前临床上应用最为广泛的降脂药物。作为羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶的抑制剂，他汀类药物能够竞争性地抑制内源性胆固醇合成限速酶(HMG-CoA)的还原酶的活性，抑制细胞内羟甲戊酸代谢途径，致使细胞内的总胆固醇合成减少，反馈性调节细胞膜表面(主要为肝细胞)低密度脂蛋白受体(LDLR)的数量和活性，使得血清中胆固醇的清除量增加，降低总胆固醇水平。然而，他汀类药物存在着引起肝脏酶异常、导致横纹肌溶解等副作用，且临床上存在着部分他汀类药物不耐受的患者。因此，开发新型降脂药物具有重要的意义。

前蛋白转化酶枯草溶菌素/kexin 9型(PCSK9)是枯草杆菌丝氨酸蛋白酶家族的成员。PCSK9能够竞争性地与LDLR结合，抑制LDLR对血浆中LDL-C的清除，引发血浆中LDL-C水平的持续增加，导致心血管疾病的易感性。研究发现，在人群中存在着PCSK9功能缺失型和功能获得型突变者。PCSK9功能获得型突变者的PCSK9活性升高，血浆中胆固醇含量较高，表现为高胆固醇血症易感。而PCSK9功能缺失型突变者往往具有较低的血浆胆固醇水平，这类人群的LDL-C的血浆水平较正常群体降低约40％左右，其患上冠心病等心血管疾病的风险很低。此外，动物实验表明PCSK9敲除的小鼠LDLR水平显著上升，循环系统中脂蛋白的清除率大大加速，而血浆胆固醇水平明显降低。这些研究表明PCSK9可以作为治疗高胆固醇血症的可行的靶点。因此，PCSK9的抑制剂的开发对于降低LDL-C的血浆浓度，减少由PCSK9介导的胆固醇及脂类代谢疾病具有积极意义。

发明内容

本发明的技术目的在于利用噬菌体展示技术获得针对PCSK9的全人源单克隆抗体的重链和轻链序列，并继而利用基因工程的方法得到完整的抗体或其功能片段。

本发明公开了一种针对哺乳动物PCSK9的全人源单克隆抗体的重链可变区，其序列与SEQ ID NO.1所示序列至少有80％同一性。其轻链可变区，其序列与SEQ ID NO.2所示序列至少有80％同一性。

本发明还公开了编码上述重链可变区的基因和编码上述轻链可变区的基因。

本发明还提供了一种针对哺乳动物包括人PCSK9的全人源单克隆抗体、其功能片段或其衍生物，具有上述的重链可变区和轻链可变区。

更具体地，本发明第一方面涉及一种针对哺乳动物包括人PCSK9的全人源单克隆抗体、其功能片段或其衍生物，其重链的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的序列分别与SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO5所示的序列具有至少80％的同一性，其轻链的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的序列与SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的序列具有至少80％的同一性。