[发明专利]大肠杆菌基因工程菌及其构建方法和在生产丙酮酸中的应用有效
| 申请号： | 201510205724.4 | 申请日： | 2015-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN104946576B | 公开（公告）日： | 2018-03-23 |
| 发明（设计）人： | 杨茂华;邢建民;刘谊兰;白冰 | 申请（专利权）人： | 中国科学院过程工程研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/90;C12P7/40 |
| 代理公司： | 北京方安思达知识产权代理有限公司11472 | 代理人： | 王宇杨,杨青 |
| 地址： | 100190 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 基因工程 及其 构建 方法 生产 丙酮酸 中的 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种大肠埃希氏菌基因工程菌YP01，其保藏号为CGMCC No.10691。
2.权利要求1所述大肠杆菌基因工程菌YP01的构建方法，所述方法包括以下步骤：
采用同源重组技术，敲除大肠杆菌K-12MG1655中的酯酰辅酶A硫酯酶III基因、酯酰辅酶A硫酯酶Ⅱ基因，命名为重组大肠杆菌Ⅰ；
采用同源重组技术，敲除重组大肠杆菌Ⅰ中的乙酸激酶基因和乙酰磷酸化酶基因，命名为重组大肠杆菌Ⅱ；
采用同源重组技术，敲除重组大肠杆菌Ⅱ中的丙酮酸氧化酶，命名为重组大肠杆菌III，即大肠杆菌基因工程菌YP01。
3.权利要求1所述大肠杆菌基因工程菌YP01在生产丙酮酸中的应用。
4.一种生产丙酮酸的方法，发酵权利要求1所述的大肠杆菌基因工程菌YP01，得到丙酮酸。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在发酵过程中通入含氧气气体，消耗碳源，生产丙酮酸，其中：
发酵温度为25℃-40℃；
发酵体系的pH值为6.0-8.0；
发酵时间为16小时-96小时；
发酵接种量的体积百分比为0.01％-10％；
发酵培养基中的碳源是葡萄糖、木糖和淀粉中的一种或几种；
发酵培养基中的氮源是酵母膏、蛋白胨、玉米浆、糖蜜、氨水、铵盐和尿素中的一种或几种。
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