[发明专利]胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及胡芦巴提取物的质量控制方法，具体地指一种胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方法。

背景技术

胡芦巴为豆科植物胡芦巴Trigonella foenum-graecum L.的干燥成熟种子。国内主要分布于河南、安徽、四川等省份。味苦，性温，归肾经，具有温肾助阳，祛寒止痛等功效。胡芦巴种子中主要含有黄酮、生物碱、皂苷和油脂等化学成分。

胡芦巴提取物是从胡芦巴的成熟种子中提取出来的棕黄色粉末，其中主要药效物质为黄酮类化合物。已有研究表明，胡芦巴中黄酮类物质对心血管系统疾病、糖尿病及其并发症有较好的治疗作用，牡荆素还具有显著地抗肿瘤、抗炎、解痉、降压等作用。

目前国内外只针对胡芦巴药材中做了HPLC指纹图谱初步研究，且并未标定共有峰的指标成分。

发明内容

本发明为了控制胡芦巴提取物的质量，提供一种胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方法。

为实现上述目的，本发明所提供的胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方法，它包括以下步骤：

(a)对照品溶液的制备：精密称取牡荆素对照品，加入甲醇溶解，制成每1mL含牡荆素150μg的溶液，即得；

(b)供试品溶液的制备：精密称取胡芦巴提取物0.5～5.0g，加入甲醇25～250mL，超声提取40～60min，过滤，取续滤液，即得；

(c)设定色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相A为甲醇，流动相B为质量百分数为0.4％磷酸缓冲盐溶液；采用梯度洗脱方式，其洗脱程序为：

0min～12min，流动相A为25％、流动相B为75％，

12min～17min，流动相A为25％→30％、流动相B为75％→70％，

17min～70min，流动相A为30％、流动相B为70％；

检测波长339nm，流速为0.8mL/min，柱温30℃；理论塔板数按牡荆素峰计，不低于3000；

(d)标准指纹图谱的获得：精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μL，按照设定的色谱条件，注入高效液相色谱仪，通过对照品牡荆素的色谱峰，确定供试品溶液色谱图中的牡荆素峰，按照色谱图方法学考察的方法得到胡芦巴提取物黄酮类成分的标准指纹图谱；

(e)色谱分析：将每批次所得的供试品溶液的指纹图谱与胡芦巴提取物黄酮类成分标准指纹图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统比较，来确定胡芦巴提取物黄酮类成分的质量。

本发明所得到的胡芦巴提取物黄酮类成分的标准指纹图谱检测出11个特征指纹峰，11号峰为牡荆素，

1号峰：保留时间：7.65±0.2min，

2号峰：保留时间：10.64±0.2min，

3号峰：保留时间：11.87±0.2min，

4号峰：保留时间：14.62±0.2min，

5号峰：保留时间：18.64±0.2min，

6号峰：保留时间：19.92±0.2min，

7号峰：保留时间：21.66±0.2min，

8号峰：保留时间：23.33±0.2min，

9号峰：保留时间：24.82±0.2min，

10号峰：保留时间：26.28±0.2min，

11号峰：保留时间：32.45±0.2min。

本发明的有益效果：本发明首次对胡芦巴提取物黄酮类成分进行指纹图谱研究，并以牡荆素峰为参照峰，采用高效液相色谱法，建立了胡芦巴提取物黄酮类成分的指纹图谱，以期控制胡芦巴提取物的质量提供科学依据。将所得的供试品溶液的指纹图谱与胡芦巴提取物黄酮类成分的标准指纹图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统试验。

本发明具有以下优点：

①本发明建立的色谱方法具有精密度高、稳定性好、重复性好的优点，符合指纹图谱的要求，可作为胡芦巴提取物黄酮类成分的质量检测方法；②本发明能将胡芦巴提取物活性成分进行有效分离，构建了胡芦巴提取物黄酮类成分的指纹图谱，填补了胡芦巴黄酮类成分的分离和指纹图谱中研究的空白；③对胡芦巴提取物黄酮类成分的质量评价不再局限于对单一化学成分的研究，而是从整体评价，应用指纹图谱特征对胡芦巴提取物黄酮类成分进行全面的质量控制，确保胡芦巴提取物药用和保健功效与安全，提供了一种有效的产品质量检测方法。

附图说明

图1为对照品牡荆素的色谱图。

图2为胡芦巴提取物黄酮类成分的标准指纹图谱。