[发明专利]一种合浦珠母贝表皮生长因子样基因Pf-egf1及其应用

说明书

技术领域

本发明属于水产生物技术领域，具体涉及的是一种合浦珠母贝(Pinctada fucata)表皮生长因子样基因Pf-egf1及其应用。

背景技术

表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)是一个大家族，包括表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)、转化生长因子-α(transforming growth factor-α，TGF-α)、肝素结合性表皮生长因子(heparin binding EGF，HB-EGF)、双调蛋白(amphiregulin，AR)、细胞素(betacellulin，BTC)、神经调节素(neuregulin，NGR)与表皮素(epiregulin，EPR)等。它们都包含至少一个保守的EGF-like结构域，这个结构域由3对二硫键所维持。EGF与EGF受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)结合，形成同源或者异源二聚体，引发一系列的信号传导，促进细胞内DNA、RNA以及蛋白质的合成，从而诱导细胞的有丝分裂、迁移和分化等过程。在目前的报道中，脊椎动物研究较多，无脊椎动物较少。Herman等从静水椎实螺(Lymnaea stagnalis)中克隆得到EGF同源基因L-egf，发现在生长及损伤修复过程中起着重要作用。Eri等人从海鞘中(Herdmania curvata)获得了一个在变态过程中发挥重要调节作用的Hemps，该基因被证明是EGF家族相关基因。Hursh等人研究了海胆(Strongylocentrotus purpuratus)中EGF家族相关基因Sp-egfI与Sp-egfII，发现其在海胆的受精以及胚胎发育等过程中发挥着重要的作用。

合浦珠母贝(Pinctada fucata)是我国海水珍珠养殖的主要珍珠贝，在我国主要分布在南方沿海地区，特别在广西合浦至广东沿海区域分布的为多，具有很高的价值。目前有关合浦珠母贝功能基因的研究主要集中在免疫基因和珍珠形成相关基因上面，如热休克蛋白Hsp70基因，组织蛋白酶基因，β-肌动蛋白基因，壳基质蛋白相关基因等，而与生长、繁育等具有经济价值性状相关的功能基因研究较少。合浦珠母贝在幼体阶段需要经历一系列变态发育过程，在珍珠养殖过程中需要进行插核手术，从而导致损伤。由于EGF具有损伤修复的功能，因此对育珠手术伤口的恢复可能会起作用。但目前还没有关于如何恢复育珠手术损伤和伤口方面的研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种合浦珠母贝表皮生长因子样基因Pf-egf1和由此推断的氨基酸序列。

本发明的第一个目的是通过如下技术方案来实现的：一种合浦珠母贝表皮生长因子样基因Pf-egf1，该基因Pf-egf1的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

该基因Pf-egf1的cDNA核苷酸序列的394bp～396bp为起始密码子ATG，1093bp～1095bp为终止密码子TGA，拥有702bp开放阅读框。

该合浦珠母贝表皮生长因子样基因Pf-egf1，它的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

表皮生长因子(EGF)家族目前主要在脊椎动物中报道比较多。本发明利用合浦珠母贝的转录组，在贝类首次克隆得到EGF-like基因Pf-egf 1，功能结构域分析发现Pf-egf1包含一个跨膜结构域(1-34aa)和一个EGF-like结构域(170-211aa)，与EGF家族其他成员及其相关蛋白相比，Pf-egf 1与他们有着共同的EGF-like结构域(图1)，包括典型的6个半胱氨酸残基与3个C末端残基(图1)，这与EGF家族及其相关蛋白是相同的，表明Pf-egf 1是EGF家族相关蛋白，表皮生长因子的6个半胱氨酸残基和3个C末端残基是维持其在生物体内得活性所必须的。