[发明专利]使用蛋白A亲和色谱法分离和纯化抗-IL-13抗体

权利要求书

1.一种从样品混合物中生产宿主细胞蛋白（HCP）减少的抗-IL-13抗体或其抗原结合部分制品的方法，所述样品混合物包括抗-IL-13抗体或其抗原结合部分和至少一种HCP，所述方法包括：

（a）  使所述样品混合物接触蛋白A亲和色谱树脂，用包含25 mM Tris、100 mM NaCl、pH 7.2的缓冲液洗涤所述亲和色谱树脂，随后用包含20 mM柠檬酸钠/柠檬酸、0.5 M NaCl、pH 6的缓冲液以及然后用包含25 mM Tris、100 mM NaCl，pH 7.2的缓冲液洗涤，并收集亲和色谱样品；

（b）  将所述亲和色谱样品的pH降低，从而形成pH降低的样品，其中所述pH的降低是约3的pH至约4的pH；

（c）  调节所述pH降低的样品的pH至约4.5至约8.5的pH，使所述调节的pH样品接触离子交换材料，并收集离子交换样品；和

（d）  使所述离子交换样品接触疏水相互作用色谱（HIC）材料，收集HIC样品，其中所述HIC样品包括所述HCP减少的抗体或其抗原结合部分制品。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b）中所述pH的降低通过使合适的酸与所述样品混合物混合来完成，并且其中所述合适的酸选自柠檬酸、醋酸、辛酸和磷酸。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述离子交换材料是阴离子交换材料或阳离子交换材料。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述离子交换材料是阳离子交换材料。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述阳离子交换材料是阳离子交换树脂，所述阳离子交换树脂包含选自SO₃^-、羧甲基、磺乙基、磺丙基、磷酸盐和磺酸盐的取代基。

6.根据权利要求4或权利要求5所述的方法，其中将步骤（c）中所述pH降低的样品的pH调节至约4.5至约6.5的pH。

7.根据权利要求3所述的方法，其中所述离子交换材料是阴离子交换材料。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述阴离子交换材料是阴离子交换树脂，所述阴离子交换树脂包含选自二乙氨基乙基（DEAE）、季氨基乙基（QAE）和季胺（Q）基团的取代基。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述阴离子交换材料是Q-琼脂糖。

10.根据权利要求7所述的方法，其中所述阴离子交换材料是季胺膜（Q膜）。

11.根据权利要求7-10中任一项所述的方法，其中将步骤（c）中所述pH降低的样品的pH调节至约8的pH。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述离子交换步骤包括第一个离子交换步骤和第二个离子交换步骤。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述HIC材料是HIC树脂。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述HIC树脂包含取代的基质，其中所述取代基由一种或多种疏水基团组成。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述一种或多种疏水基团选自烷基、芳基及其组合。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述基质是苯基取代的琼脂糖树脂。

17.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括过滤步骤，其中对所述HIC样品实施过滤，以去除病毒颗粒和促进缓冲液更换。

18.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗-IL-13抗体或其抗原结合部分是人源化的抗体、嵌合的抗体或多价抗体。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述抗-IL-13抗体或其抗原结合部分是人源化的抗体。

20.根据权利要求1所述的方法，其另外包括深度过滤步骤。

21.根据权利要求1所述的方法，其中：

将步骤（b）中所述亲和色谱样品的pH降低至pH 3.5，

将步骤（c）中所述pH降低的样品的pH调节至pH 8，并且所述离子交换材料是Q膜，和

步骤（d）中所述HIC材料是苯基取代的琼脂糖。